秦岭细鳞鲑仔稚鱼耳石微结构及荧光标记研究

论文摘要

秦岭细鳞鲑（Brachymystax lenok tsinlingensis）为冰期自北方南移的残留种,隶属于鲑形目（Salmoniformes）、鲑科（Salmonidae）、细鳞鲑属（Brcahymystax）,为我国特有种,主要分布于渭河上游及其支流和汉水北侧支流渭水河、子午河的上游,1988年被列为国家Ⅱ级重点保护动物,属濒危物种。然而,对该物种基础生物学和生态学等研究仍然相当薄弱,物种保护、资源增殖和保护区管理缺乏有效的理论依据。本文以人工繁殖和自然繁殖的秦岭细鳞鲑仔稚鱼为实验材料,观察其耳石微结构特征,研究仔稚鱼耳石形态发育、生长轮沉积规律,并通过日轮信息对其自然繁殖期进行了初步退算；对秦岭细鳞鲑胚胎及仔鱼耳石标记方法进行了探讨。主要结果如下：1.矢耳石和微耳石在仔鱼出膜当日出现,均呈圆盘状,矢耳石稍大,星耳石在仔鱼孵出后24d出现。随着仔鱼的发育,耳石的形状也逐渐改变。矢耳石在仔鱼孵化一周,开始形成椭圆状多核并向两端伸长,24d后形成稳定的前段较尖、后端圆钝的蚌状；微耳石在仔鱼孵化一周后,转变为多原基的近椭圆形,24d后耳石核心偏向,55d后转变为边缘具有波状起伏的梨形。相比其他两种耳石,耳石形状为较稳定的扇形,但核内耳石原基和中心核模糊,耳石中心核偏向一端。2.仔鱼耳石上可观察到原基、中心核和生长轮等。秦岭细鳞鲑耳石属多核多原基结构,其中以两中心核五原基最为常见。秦岭细鳞鲑仔鱼在孵出24h内出现第一条较为模糊的生长轮,之后每天形成一个轮纹。矢耳石相比其它两种耳石,尺寸较大较易摘取,且轮纹较易观察,所以本文推荐使用矢耳石为最佳观察对象。矢耳石生长轮数与日龄呈线性相关,相关方程为：N=0.9805d-0.098（r2=0.9987,n=77,P<0.001）。3.秦岭细鳞鲑初孵仔鱼全长为11.10-11.54 mm,孵出18d仔鱼卵黄囊接近消失。从仔鱼刚孵出到卵黄囊消失前后,仔鱼全长随日龄增长速率变缓；对仔鱼耳石长径的测定数据分析表明,在仔鱼全长19 mm左右耳石长径和体长的生长关系也存在一个拐点。仔鱼全长小于19mm,矢耳石长径（R）和仔鱼全长（L）呈指数关系；当仔鱼全长大于19mmm,微耳石和矢耳石长径与仔鱼全长呈线性增长。4.对采自咸宜河中段的116尾秦岭细鳞鲑仔稚鱼全长和日龄分布进行了统计,仔稚鱼全长范围土要集中在26-28 mm之间,日龄范围为18-41 d,以26-32 d日龄所占比例较高,占总数的57.76%。根据采样时间及仔稚鱼日龄分布等退算,当年秦岭细鳞鲑仔稚鱼在咸宜河中段的孵出日期为4月28日-5月21日,主要孵出高峰在5月上旬；同时结合实验室条件下秦岭细鳞鲑从受精卵到仔鱼出膜所需积温（197℃）与采样河道水温数据,退算出当年秦岭细鳞鲑自然群体最早的产卵日期为4月2日,最晚日期为5月5日。5.采用茜素络合物（ALC）在秦岭细鳞鲑胚胎和仔鱼阶段进行浸泡标记试验,在荧光显微镜下观察,耳石都出现橘红色荧光标记。浸泡胚胎组最适处理条件是茜素络合物溶液浓度30 mg/L持续浸泡18 h,标记率100%,出膜后15d仔鱼存活率91%,标记环“非常明显”；仔鱼浸泡组最适处理条件是茜素络合物溶液浓度120mg/L持续浸泡12h,标记率83.3%,处理15d后仔鱼存活率92.3%,相比对照组统计检验无差异,标记环“较明显”。相比上述两种方法,浸泡胚胎试验组相比浸泡30d仔鱼试验组所需要的茜素络合物（ALC）溶液浓度更低,而且在标记成功率、标记效果、标记后仔鱼存活率以及标记成本等方面也更为理想。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1 秦岭细鳞鲑资源及其研究现状
• 1.1 细鳞鱼概述
• 1.2 秦岭细鳞鲑生物学概述及研究现状
• 1.2.1 秦岭细鳞鲑的分类学地位
• 1.2.2 秦岭细鳞鲑的形态特征
• 1.2.3 秦岭细鳞鲑的生活习性
• 1.2.4 秦岭细鳞鲑资源及研究现状
• 2 鱼类耳石研究进展
• 2.1 鱼类耳石的形成及显微结构
• 2.2 鱼类耳石生长
• 2.2.1 第一生长轮出现
• 2.2.2 环境因素对日轮产生的影响
• 2.3 耳石微结构在鱼类生态学研究中的应用
• 2.3.1 年龄的鉴定
• 2.3.2 生活史研究
• 2.3.3 种类和群统计鉴别
• 3 鱼类标记技术研究进展
• 3.1 鱼类标记概述
• 3.2 鱼类标记技术分类
• 3.2.1 外标志
• 3.2.2 外标记
• 3.2.3 内标志
• 3.2.4 自然标记
• 3.2.5 生物遥测
• 3.2.6 化学标记
• 3.2.7 遗传标记
• 3.3 鱼类标记技术选择
• 3.4 鱼类荧光浸泡标记研究进展
• 4 本研究的目的和意义
• 第二章 秦岭细鳞鲑仔鱼耳石显微结构研究及其在自然群体繁殖期退算上的应用
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 亲鱼捕获和人工繁殖
• 2.2 野生仔稚鱼样本采集与水温记录
• 2.3 耳石摘取
• 2.4 耳石测量与生长轮统计
• 3 研究结果
• 3.1 耳石形态发育
• 3.2 耳石原基和中心核的形态特征
• 3.3 耳石日轮确证及日轮特征
• 3.3.1 生长轮的形成
• 3.3.2 耳石上生长轮的沉积规律
• 3.3.3 耳石标记轮
• 3.4 耳石大小与鱼体大小的关系
• 3.5 野生群体秦岭细鳞鲑仔稚鱼耳石结构特征
• 3.6 野生群体秦岭细鳞鲑仔稚鱼全长分布及日龄组成
• 3.7 野生群体秦岭细鳞鲑孵出期及产卵期的退算
• 4 讨论
• 4.1 耳石的形态变化及耳石原基
• 4.2 耳石日轮确证
• 4.3 耳石大小和鱼体大小的关系
• 4.4 耳石标记轮的形成
• 4.5 人繁群体与野生群体仔鱼耳石清晰度差异
• 4.6 关于野生群体孵出期和产卵期的退算
• 第三章 秦岭细鳞鲑胚胎及仔鱼耳石荧光标记研究
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 实验鱼来源及饲养管理
• 2.2 试剂及浸泡液配置
• 2.3 实验方案
• 2.4 耳石摘取与标记检测
• 2.5 统计学处理
• 3 结果与分析
• 3.1 荧光标记效果
• 3.2 茜素络合物溶液浸泡处理对秦岭细鳞鲑仔鱼孵化率和生长率的影响
• 4 讨论
• 4.1 关于浸泡方法
• 4.2 浸泡试剂的选择
• 4.3 ALC浸泡液的PH值与ALC标记保存时间
• 4.4 胚胎、仔鱼阶段浸泡标记效果比较及合适阶段标记选择
• 4.5 荧光标记的检测及茜素络合物（ALC）浸泡中仔鱼耳石标记轮的产生
• 4.6 关于耳石标记的研究
• 参考文献
• 图版
• 附录
• 致谢