IL-4RA基因转染阻止了哮喘模型的炎症发展

论文摘要

本实验的目的是针对哮喘模型进行基因治疗,IL-4和IL-13是诱发哮喘的关键细胞因子,IL-4、IL-13的受体重叠性构成一个复杂的共刺激信号,可以诱导STAT6的磷酸化。IL-4-STAT6途径在B细胞IgE型转换的过程中起到重要的作用,IL-13也可以激活STAT6途径并诱导IgE的生成。经证明鼠IL-4变异体C118（C末端118以后的氨基酸删除）蛋白有效的阻止了IL-4和IL-13诱导的信号传导和IgE水平,同时也阻止了过敏性气道嗜酸细胞浸润和AHR。目前鼠IL-4的双变异蛋白Q116D/Y119D（IL-4受体拮抗剂-IL-4RA）经证明可以阻止哮喘模型肺组织中STAT6的磷酸化,同时也阻止了过敏性气道嗜酸细胞浸润、气道高反应性和血浆IgE水平的升高。本实验就是采用能够拮抗IL-4和IL-13的IL-4变异体（Q116D/Y119D）-IL-4RA对哮喘模型进行基因治疗。首先用IL-4的突变引物对刺激后的BALB/C小鼠脾细胞悬液用RT-PCR的方法实现了IL-4突变基因扩增,随后将目的基因IL-4RA克隆入逆转录病毒真核表达载体并检测其在真核细胞BHK-21中的表达,然后利用携带目的基因的逆转录载体转染PA317细胞,包装出逆转录病毒,并对逆转录病毒进行浓缩和滴度测定。运用逆转录病毒能够整合到宿主基因组的特点,通过呼吸道给药转染小鼠哮喘模型,观察其对哮喘模型的治疗作用。本试验用逆转录病毒做为载体将目的基因IL-4RA转染小鼠哮喘模型,成功地拮抗了哮喘模型的过敏性炎症的产生和STAT6的表达,因为逆转录病毒载体可以整合到宿主的基因组并持续表达,故该试验有一定的临床意义,另外转染的目的基因与IL-4的分子结构差异很小,有很小的免疫源性,可以减轻宿主的免疫排斥反应。本试验为下一步对人类哮喘治疗的临床研究起到一个积极的促进作用。

论文目录

• 英文缩写词
• 引言
• 第一篇 文献综述
• 第一章 关于IL-4 与IL-13 对哮喘发病机制的研究进展
• 第二章 哮喘的基因治疗和逆转录病毒载体的研究进展
• 第三章 STAT6 介导的信号转导与哮喘的关系
• 第四章 IL-4RA 对哮喘治疗作用的研究及意义
• 第二篇 研究内容
• 第一章 BALB/C 小鼠脾细胞IL-4RA 基因的提取及鉴定
• 1. 材料
• 2. 方法
• 3. 结果
• 4. 讨论
• 5. 小结
• 第二章 IL-4RA 逆转录病毒载体的构建及真核表达
• 1. 材料
• 2. 方法
• 3. 结果
• 4. 讨论
• 5. 小结
• 第三章 IL-4RA 重组逆转录病毒载体的包装及浓缩
• 1. 材料
• 2. 方法
• 3. 结果
• 4. 讨论
• 5. 小结
• 第四章 pLNC-IL-4RA 基因转染对哮喘模型的干预作用
• 1. 材料
• 2. 方法
• 3. 结果
• 4. 讨论
• 5. 小结
• 第五章 pLNC-IL-4RA 基因转染对哮喘模型Th1/Th2 细胞因子和BALF 细胞数的干预作用
• 1. 材料
• 2. 方法
• 3. 结果
• 4. 讨论
• 5. 小结
• 第六章 IL-4RA 在肺组织基因组的整合及其转染对哮喘模型STAT6 的影响和免疫组化分析
• 第一节 各组小鼠肺组织STAT6 的免疫组化分析
• 1. 材料
• 2. 方法
• 3. 结果
• 4. 讨论
• 5. 小结
• 第二节 用PCR 方法检测IL-4RA 在肺组织基因组中的整合
• 1. 材料
• 2. 方法
• 3. 结果
• 4. 讨论
• 5. 小结
• 结论
• 附图
• 参考文献
• 攻读博士期间发表论文
• 中文摘要
• 英文摘要
• 致谢