降脂益肝冲剂对非酒精性脂肪肝大鼠肝组织抵抗素mRNA表达的影响

论文摘要

目的:非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）,代表了一组以甘油三酯在肝内过度贮积而引起的临床病理综合征,其范畴包括单纯性脂肪肝（NASFL）、非酒精性脂肪性肝炎（NASH）和NASH相关性肝硬化。近年研究发现其发病率不断攀高且起病渐趋低龄化,并可发展为肝纤维化、肝硬化等终末期肝病。然而,其发病机制尚不明确,临床上仍缺乏有效的治疗手段。目前认为其属于代谢综合征（MS）的范畴,胰岛素抵抗及炎症因子的参与是其发病的重要环节。抵抗素是一种富含半胱氨酸的分泌性蛋白,因其可影响与胰岛素作用相关的葡萄糖代谢以及脂代谢,具有对抗胰岛素的作用而命名。新近发现它还可作为促炎因子参与炎症的级联反应,与NASH的发病关系密切。本实验采用高脂胆固醇饮食建立非酒精性脂肪肝大鼠模型,动态观察大鼠肝组织中抵抗素mRNA的表达情况,对抵抗素在NAFLD发病机理中的作用进行初步探讨,同时观察降脂益肝冲剂对肝组织抵抗素mRNA表达的影响,探讨其可能的分子治疗机制,为其更广泛的临床应用提供实验依据。方法:1.动物模型的建立及标本的采集:72只雄性Wistar大鼠正常喂养一周后,随机分为正常对照组（N组）:给予正常饲料;模型对照组（M组）,药物干预组（D组）:给予高脂饲料（85%普通饲料,13%的猪油和2%的胆固醇）,每组24只,分别设8、13、18周三个时相点,每个时点8只大鼠,相对应的组别为N1、N2、N3,M1、M2、M3,D1、D2、D3组。D1、D2、D3组分别于实验开始、第8周末和第13周末,给予降脂益肝冲剂1ml/100g,以0.8g/ ml的浓度溶解灌胃,每日两次,分别持续8W,5W,5W。同时M组和N组分别给予等量的生活饮用水灌胃。实验结束后分阶段处死各组大鼠,自腹主动脉采血,迅速取出肝脏,按常规制备血清、肝匀浆以及肝组织切片,并留取少量肝组织于-70℃低温保存。2.检测指标:测体重、体长、肝脾湿重,并计算肝指数（肝湿重/体重×100%）、Lee’s指数（体重0.33/体长×1000）及肝脾比值（肝湿重/脾湿重）等体质指标;全自动生化分析仪测定丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、血脂及肝组织脂质含量,葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖（FBG）,铜染色法测定血清和肝组织FFA水平,放免法测定血清空腹胰岛素（FINS）和TNF-α水平,计算胰岛素敏感指数（ISI=ln〔1/（FINS×FBG）〕）;比色法测定血清和肝组织GSH含量,黄嘌呤氧化酶法测定血清和肝组织SOD活性;硫代巴比妥酸法测定血清和肝组织MDA含量;光镜下评估脂肪变性和炎症活动情况;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定肝组织抵抗素mRNA的表达。结果:1.N组大鼠肝小叶结构完整,肝索围绕中央静脉呈放射状分布,细胞呈多边形,大小较一致;各项生化指标均在正常范围;抵抗素mRNA表达微弱。2. 8周末,模型组大鼠出现了明显的脂质代谢紊乱,伴随高胰岛素血症和胰岛素抵抗;血清转氨酶水平较正常组明显升高,TNF-α水平升高;肝组织出现了轻到中度脂肪变,且无炎细胞浸润;肝脏抵抗素mRNA的表达较其对照组显著升高。用药组大鼠血清和肝组织各项指标均明显改善;肝脂变程度较模型组明显减轻;肝组织抵抗素mRNA表达显著降低（P<0.05）。3. 13周末,模型组大鼠胰岛素抵抗程度较前无明显进展;和正常组相比,血脂和肝脏脂质含量、血清TNF-α含量、转氨酶水平明显升高;HDL-C含量明显降低;肝组织出现中到重度脂肪变,肝小叶内炎细胞浸润和散在的点状坏死,炎症活动度计分明显高于正常组（P<0.01）;肝组织抵抗素mRNA表达显著升高,且与前期相比差异显著（P<0.01）。用药组大鼠血清和肝组织各项指标均明显改善;肝组织抵抗素mRNA表达显著降低（P<0.01）;肝组织脂变程度及炎症活动度明显减轻（P<0.05,P<0.01）。4.18周末,模型组大鼠胰岛素抵抗程度较前仍无明显进展;和正常组相比,血脂和肝脏脂质含量、血清TNF-α含量、转氨酶水平明显升高;HDL-C含量明显降低;肝组织弥漫性脂肪变性及气球样变性,小叶内和汇管区不同程度的炎症细胞浸润和坏死;炎症活动度计分明显高于正常组（P<0.01）;肝组织抵抗素mRNA表达继续显著升高,与前期相比差异显著（P<0.01）。用药组大鼠血清和肝组织各项指标均明显改善;肝组织抵抗素mRNA表达显著降低（P<0.01）;肝组织脂变及气球样变程度明显减轻（P<0.01）,炎症活动度也明显减轻（P<0.01）。5.相关性分析显示:模型组各时点肝脏抵抗素mRNA水平均与血清TNF-α水平、肝脏炎症活动度计分呈正相关（P<0.01或P<0.05）。而与ISI仅在8周末模型组呈负相关（P<0.01）,第13,18周末二者无相关性。结论:1.高脂高胆固醇饮食可以成功复制NAFLD大鼠模型;胰岛素抵抗、脂质代谢紊乱、氧化应激脂质过氧化损伤以及炎症因子如TNF-α紊乱与NAFLD的发生密切相关。2.正常大鼠肝脏可表达抵抗素,NAFLD大鼠肝脏抵抗素基因表达上调,且随造模时间延长表达量显著增加;相关性分析提示抵抗素可能通过胰岛素抵抗触发NASFL的形成,通过对炎症因子的调控参与NASH的发生;并与NAFLD相互促进,形成恶性循环。3.JYC对NAFLD具有良好的防治疗效果,其部分作用的发挥可能与下调肝脏抵抗素mRNA的表达有关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩写词表
• 正文
• 前言
• 第一章 材料和方法
• 第二章 结果
• 第三章 讨论
• 第四章 结论
• 参考文献
• 图表
• 附图
• 综述
• 正文
• 参考文献
• 作者简介
• 致谢