论文摘要
目的：吗啡主要通过阿片受体发挥生物效应,广泛用于治疗疼痛,但存在许多副作用,包括睡眠紊乱。临床使用量能减少深度睡眠（stage4）和快动眼睡眠；动物急性给予低剂量吗啡产生觉醒效应。已知阿片受体有mu、kappa和delta三种亚型。腹外侧视前区（VLPO）是促睡眠相关核团,mu和kappa受体mRNA在VLPO区有一定程度的表达,推测吗啡可能通过VLPO发挥觉醒作用。采用细胞膜片钳技术,在细胞水平上研究吗啡对VLPO神经元的作用和受体机制,运用睡眠觉醒记录解析系统,在整体水平上研究VLPO区阿片受体在吗啡调节睡眠觉醒中的作用。方法：VLPO主要存在两类神经元,即睡眠促进神经元和中间神经元。睡眠促进神经元呈三角形或多边形,电生理学上具有低阂值峰电位,可被去甲肾上腺素（noradrenaline, NA）等觉醒相关神经递质抑制；中间神经元呈梭形,不能产生低阈值峰电位,被NA等兴奋。本实验在离体脑片上,根据神经元对NA的反应,对VLPO神经元进行分类和鉴别,观察吗啡对其兴奋性的影响,并研究受体机制。利用高度自动化睡眠觉醒生物解析系统,在VLPO区手术埋植导管的自由运动大鼠上,从整体水平研究VLPO在吗啡促觉醒效应中的作用。皮下注射不同剂量的吗啡（0.3、1和3mg/kg）,找出最适宜剂量后做进一步研究。VLPO局部微注射mu受体拮抗剂CTOP（0.05、0.15和0.5nmol/side）或kappa受体拮抗剂nor-BIN（0.5和1.5pmol/side）,15min后皮下注射吗啡,观察这些拮抗剂是否能拮抗吗啡的作用；通过VLPO单独微注射CTOP（0.5nmol/side）和nor-BIN （1.5pmol/side）,观察对生理性睡眠觉醒是否有影响。结果：离体脑片研究显示：0.1μM吗啡对VLPO睡眠促进神经元动作电位发放频率没有显著影响；1、10和100μM吗啡都可完全抑制睡眠促进神经元动作电位发放。但最大剂量吗啡（100μM）对中间神经元动作电位发放频率没有影响。在TTX存在下,10μM吗啡引起睡眠促进神经元膜电位超极化,可被mu受体拮抗剂CTOP （1μM）逆转。说明吗啡可以通过mu受体,使睡眠促进神经元超极化。在CTOP （1μM）存在下,吗啡仍能抑制睡眠促进神经元放电,这种抑制效应可被kappa受体拮抗剂（nor-BIN）阻断；离体脑片直接灌流kappa受体激动剂（U50488H）可抑制睡眠促进神经元的放电。说明吗啡也能通过kappa受体抑制促睡眠神经元。kappa受体激动剂U50488H可抑制促睡眠神经元mEPSC的频率,但不影响其幅度。说明kappa受体可突触前抑制睡眠促进神经元谷氨酸能突触传递,从而间接地抑制睡眠促进神经元。行为学研究发现：皮下注射0.3、1和3mg/kg吗啡能剂量依赖地改变动物觉醒水平。吗啡（1和3mg/kg）在给药后3小时分别增加觉醒63.5%和71.5%,0.3mg/kg对睡眠觉醒行为无显著影响。与VLPO双侧微注射生理盐水组相比,CTOP（0.5、0.15、0.05nmol/side）可剂量依赖性减少1mg/kg吗啡引起的觉醒,同时增加NREM睡眠和REM睡眠量,但or-BIN （0.5、1.5pmol/side）不能拮抗吗啡引起的觉醒作用。VLPO微注射CTOP或nor-BIN对生理性睡眠觉醒行为没有影响。小结：在离体脑片,吗啡通过mu和kappa受体抑制VLPO促睡眠神经元。在整体水平,吗啡主要通过VLPO的mu受体诱导觉醒。