共刺激分子配体PD-L1、PD-L2的真核表达及其转基因小鼠的制备

论文摘要

PD-L1、PD-L2是新发现的B7家族共刺激分子配体,二者具有共同的受体PD-1,并通过与受体PD-1结合抑制T细胞的增殖和过度活化,在细胞免疫应答过程中起负调控作用,同时通过影响细胞因子的分泌对体液免疫也发挥了调控作用。PD-L1、PD-L2/PD-1路径在机体自身免疫耐受和肿瘤细胞逃逸机体免疫监控过程中都发挥着重要作用。 本研究通过RT-PCR的方法成功地从PHA刺激的小鼠外周血单个核细胞和小鼠胸腺组织中克隆了PD-L1和PD-L2基因,并构建了重组真核表达载体pEF6/PD-L1-V5 His和pEF6/PD-L2-V5 His。两个重组质粒转染CHO细胞,经间接免疫荧光实验证明了构建的重组质粒可以CHO细胞中的成功表达PD-L1和PD-L2基因。稳定筛选后,经western-blot检测得到了稳定表达PD-L1和PD-L2的细胞株,为体外研究PD-L1和PD-L2对免疫调控的作用建立了细胞工具。 重组质粒经酶切,显微注射和PCR筛选分别得到了PD-L1的2只Found小鼠和PD-L2的1只Found小鼠,但只有PD-L2Found小鼠可通过生殖器官稳定遗传了PD-L2基因。并且通过southern-blot得到验证。 本研究通过克隆PD-L1和PD-L2基因来构建稳定表达细胞系和转基因小鼠是成功的。将为进一步研究PD-L1和PD-L2对免疫调控的作用提供有用的工具。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 文故综述
• 研究内容
• 第一部分
• 1.材料
• 2.方法
• 3.结果
• 4.讨论
• 第二部分
• 1.材料
• 2.方法
• 3.结果
• 4.讨论
• 第三部分
• 1.材料
• 2.方法
• 3.结果
• 4.讨论
• 致谢