论文摘要
第一部分强力霉素调控表达的人肝癌HepG2Tet-on细胞系的建立目的构建可以用强力霉素调控表达的人肝癌HepG2Tet-on细胞系方法脂质体转染法将pWHE146质粒转染到人肝癌HepG2细胞中,G418筛选出稳定表达细胞克隆;单克隆分别扩增后,瞬时转染pTRE-hyg-luc质粒,强力霉素诱导表达后,检测荧光素酶表达活性,挑选出受强力霉素调控的低背景、高表达的HepG2Tet-on细胞株。结果成功构建了一株受强力霉素调控的高表达低背景的HepG2Tet-on细胞株。结论HepG2Tet-on细胞株可用于外源基因的真核调控高表达,为研究真核基因功能提供了一种有力的实验手段。第二部分强力霉素调控HIF-1α表达的人肝癌HepG2Tet-on-HIF-1α双稳细胞系构建目的建立强力霉素调控HIF-1α表达的人肝癌HepG2Tet-on-HIF-1α双稳细胞系。方法脂质体转染法将重组质粒pTRE-HIF-1α转染入HepG2Tet-on细胞株,潮霉素（hyg）筛选出稳定表达细胞克隆HepG2Tet-on-HIF-1α;用强力霉素（1μg/ml）诱导后,用RT-PCR和Western-blot检测HIF-1α表达。结果强力霉素（1μg/ml）可诱导HepG2Tet-on-HIF-1α细胞HIF-1αmRNA（5.899±2.176倍）和蛋白表达增加（2.179±0.742倍）。结论成功建立强力霉素调控HIF-1α表达的人肝癌HepG2Tet-on-HIF-1α双稳细胞系,为深入研究HIF-1α在肝癌细胞中的作用提供了有力的实验手段。第三部分调控HIF-1α表达对人肝癌HepG2细胞增殖及侵袭能力的影响目的探讨体外常氧下,诱导表达HIF-1α对HepG2细胞增殖及侵袭能力的影响。方法常氧下,四甲基偶氮唑盐法检测缺氧诱导因子1α对细胞增殖、黏附能力的影响,Transwell法检测其对侵袭能力的影响。结果增殖实验中,Dox（+）组与Dox（-）组各时段A490nm值无差异（P>0.05）;黏附实验中,Dox（+）组的A490nm值明显高于Dox（-）组（P=0.008）;Dox（+）组侵袭细胞数（37.611±8.424）明显高于Dox（-）组（25.333±8.117）（P<0.001）。结论常氧下,缺氧诱导因子1α不影响HepG2细胞的增殖,但明显增加其黏附和侵袭能力。第四部分强力霉素调控HIF-1α表达的裸鼠肝癌皮下移植瘤模型的建立目的建立可以由强力霉素（Dox）诱导HIF-1α表达的裸鼠肝癌皮下移植瘤模型。方法注射法建立裸鼠肝癌HepG2Tet-on-HIF-1α细胞皮下移植瘤模型;口服强力霉素7周,RT-PCR和Western-blot检测皮下移植瘤中HIF-1α表达。结果与Dox（-）组相比,Dox（+）组裸鼠HepG2Tet-on-HIF-1α细胞皮下移植瘤中HIF-1αmRNA（4.303±1.004倍）和蛋白（1.666±0.079倍）表达增加。结论口服强力霉素可以有效地诱导裸鼠HepG2Tet-on-HIF-1α细胞皮下移植瘤中HIF-1αmRNA和蛋白表达增加,为体内研究HIF-1α对肝癌的作用提供了有效的实验手段。第五部分强力霉素调控HIF-1α表达对裸鼠肝癌皮下移植瘤的作用目的探讨体内调控表达HIF-1α对裸鼠肝癌皮下移植瘤生长和凋亡的影响。方法强力霉素诱导裸鼠肝癌HepG2Tet-on-HIF-1α细胞皮下移植瘤缺氧诱导因子1α表达;观察上调缺氧诱导因子1α表达对裸鼠皮下移植瘤生长的影响;Tunel法检测两组皮下移植瘤原位凋亡的情况;免疫组化和western blot检测两组皮下移植瘤中血管生成情况。结果Dox（+）组在肿瘤体积、重量、生长速度上都明显超过Dox（-）组,肿瘤内坏死面积明显小于Dox（-）组;同Dox（-）组相比,Dox（+）组裸鼠体重下降更为明显,两组均无肝、肺转移发生;Dox（+）组皮下移植瘤的细胞凋亡较Dox（-）组少,而血管则较多。结论体内实验中,缺氧诱导因子1α可促进肿瘤的生长;其机制可能是促进肿瘤内部血管生成,及减少肿瘤细胞凋亡。
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- [3].Tet-on系统诱导乳腺特异表达CUEDC2转基因小鼠的制备[J]. 科学技术与工程 2011(21)
- [4].Tet-on系统对胰岛细胞瘤中TRB3基因的表达调控作用[J]. 肝胆外科杂志 2008(05)
- [5].干扰素膜蛋白Tet-on系统稳定细胞系的建立及对CA16病毒的抑制作用[J]. 中国生物化学与分子生物学报 2014(05)
- [6].Tet-On调控自杀基因治疗系统对乳腺癌细胞的DNA损伤效应[J]. 中南大学学报(医学版) 2011(09)
- [7].Tet-on诱导表达c-myc和SV40Tag的转基因小鼠肿瘤模型[J]. 中国实验动物学报 2008(04)
- [8].构建Tet-on调控稳定表达肝细胞生长因子、成纤维细胞生长因子-4的人类MSCs细胞株[J]. 世界华人消化杂志 2015(27)
- [9].Tet-on系统调控A20基因在鼻咽癌肝转移亚系中的表达[J]. 热带医学杂志 2009(05)
- [10].Tet-on调控的人HOXB4慢病毒载体构建[J]. 中国实验诊断学 2014(02)
- [11].Tet-on基因表达系统反应质粒P~(TRE-HIF-1α)的构建和表达鉴定[J]. 中国普外基础与临床杂志 2008(12)
- [12].新型低基础表达Tet-on基因表达系统的构建与鉴定[J]. 军事医学科学院院刊 2008(04)
- [13].新型Tet-On系统大鼠GDNF和TH双基因的慢病毒载体的构建与表达[J]. 中国药理学通报 2010(08)
- [14].人巨细胞病毒即刻早期蛋白IE2在Tet-On系统调控下的表达及其抗凋亡作用[J]. 病毒学报 2009(03)
- [15].利用Tet-on调控系统建立人肝癌HepG2~(Tet-on)细胞系[J]. 中国普通外科杂志 2009(02)
- [16].慢病毒Tet-On系统调控Notch1-EGFP融合蛋白在PC12细胞中表达的研究[J]. 中国应用生理学杂志 2013(03)
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- [24].Tet-on慢病毒系统表达弓形虫ROP18的研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2015(01)
- [25].Tet-on和Cre/loxP系统双重调控HCV NS5B真核表达载体的设计与构建[J]. 现代生物医学进展 2010(19)
- [26].基于Tet-On系统构建Alb启动子调控猪uPA转基因表达的慢病毒载体[J]. 中国比较医学杂志 2019(05)
- [27].一种高效的单质粒模式四环素诱导表达系统的构建[J]. 中国生物化学与分子生物学报 2012(12)
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