局灶性脑缺血再灌注后凋亡调控基因表达及EGb761干预的实验研究

论文摘要

目的 观察 XIAP、Smac/DIABLO（以下简称 Smac）、Caspase-3P17 在大鼠局灶性脑缺血再灌注模型中的动态表达及EGb761的干预效果; 深入探讨脑缺血再灌注损伤的发病机制及 EGb761 可能的脑保护机制。 方法 体重250-300g的雄性Wistar大鼠按照 Longa等的方法制作MCAO 1.5h 再灌注模型,分为假手术组 （组 A）、缺血再灌注组 （组 B） 、EGb761 低剂量（50mg/kg）组 （组 C） 及 EGb761 高剂量组（100mg/kg） （组 D）。后两组在手术前 1h 分别经腹腔注射 EGb761 50 mg/kg、100mg/kg,1 次/日;各组再分为再灌注 6 h、12h、24h、48h、72h 小组,除 24h 小组 10 只大鼠外,（5 只用于测量梗死体积）,其余各时间点每组 5 只。H.E 染色观察组织病理改变,尼氏染色观察神经元的存活情况,TTC 法检测梗死体积、免疫组化法检测 XIAP、Smac、Caspase-3P17 蛋白表达。 结果 XIAP、Smac 在假手术组及手术组的非缺血侧脑组织中有少量表达,但未见 Caspase-3P17 染色阳性细胞。与假手术组相比,再灌注 6hXIAP表达开始增高（P=0.000）,再灌注 12h 表达达高峰,再灌注 24h 后表达下降,48h 趋于正常（p=0.649）,阳性细胞定位于缺血半暗带内的神经元内;Smac蛋白表达也于再灌注 6h 开始增多（p=0.002）,再灌注 24h 表达最多,至 72h表达与假手术组相比,无显著差异（p=0.505）。而 Caspase-3P17 于再灌注 6h开始有少量表达,24 h 时表达达高峰,至 72h 表达水平仍较高,与再灌注 6h相比,差异仍具有统计学意义（p=0.000）。 术前经腹腔注射 50mg/kg 和 100mg/kg 后,与缺血再灌注组相比,XIAP表达及 XIAP/ Smac 的比例都增加,而 Smac（除 72h 外）及活化 Caspase-3表达减少,脑梗塞体积明显缩小,神经功能缺失减轻,各组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 1. 局灶性脑缺血再灌注可诱导 XIAP 和 Smac 基因表达,其平衡失调导致了 Caspase-3 的活化,说明脑缺血可启动凋亡调控基因,凋亡机制参与了脑缺血再灌注损伤。2. EGb761 通过调控 XIAP、Smac 信号通路,抑制Caspase-3 激活, 减少神经细胞死亡,改善脑功能,并呈量-效关系。EGb761可能为目前较有价值的神经保护剂,并推测作用于Caspase-3级联反应的上游。 关键词 大鼠; 脑缺血; XIAP; Caspase; Smac/DIABLO; EGb761

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