NRG-1治疗糖尿病心肌病大鼠的实验研究

论文摘要

目的：通过干扰NRG-1/ErbB信号通路,观察对链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病心肌病治疗作用的影响,同时为糖尿病心肌病的治疗提供新的靶点。方法：1、选取雄性SD大鼠50只（体重250-300mg）,随机选取10只为正常对照,喂以普通饲料,其余40只大鼠为模型组,腹腔注射链脲佐菌素70mg/kg,每周检测血糖,血糖高于16.7mmol/L则认为糖尿病模型建成,血糖稳定12周后糖尿病心肌病（DCM）模型建成。2、再将DCM大鼠随机分为NRG-1组（11只）：DCM大鼠尾静脉注射重组NRG-1（10μg/kg,隔日1次,共2周）,Herce组（12只）：相同方法注射NRG-1外,每周2次尾静脉注射trastuzumab（10μg/kg,共2周）,DCM组（12只）：同样方法尾静脉注射生理盐水2周,3组大鼠同等条件下继续饲养2周后进行实验。3、应用心脏超声诊断仪测大鼠左心室舒张末期内径（LVEDD）、左心室收缩末期内径（LVESD）,计算左室射血分数（LVEF）及左室短轴缩短率（FS）以评价心功能,RT-PCR法检测ANP、BNP mRNA的表达；Masson胶原特殊染色法测定胶原容积分数（CVF）, RT-PCR法检测各组Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达及Ⅰ/Ⅲ型胶原mRNA比值的比较；Tunel法检测各组心肌凋亡细胞,RT-PCR检测各组P53mRNA凋亡相关基因的表达。结果：1、NRG-1组相对于Herce组、DCM组,LVEDD/LVESD平均值降低,LVEF/FS平均值升高,ANP、BNP mRNA表达下调（P<0.05）, Herce组和DCM组相比,心功能各指标及ANP、BNP mRNA表达无明显统计学意义（P>0.05）。2、NRG-1组相对于Herce组、DCM组,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达下调,且Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维mRNA比值降低（P<0.05）, Herce组和DCM组相比较,无明显差异（P>0.05）,并且Masson胶原染色结果显示,NRG-1组与Herce组、DCM组相比较,胶原容积分数减少（接近正常水平）,Herce组和DCM组相比,无明显差异（P>0.05）。3、Tunel法检测显示,NRG-1组较Herce组、DCM组,心肌细胞凋亡数量明显减少,Herce组和DCM组相比,无明显统计学差异；NRG-1组较Herce组、DCM组,P53mRNA表达下调（P<0.01）, Herce组和DCM组相比,P53mRNA表达均上调,且组间无明显统计学差异（P>0.05）。结论：NRG-1/ErbB信号通路,可能涉及糖尿病心肌病发病机制。外源性给予NRG-1,可以减少心肌胶原的沉积,抑制心肌细胞的凋亡,发挥其保护性机制,延缓心力衰竭发展进程。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 前言
• 第2章 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 实验动物
• 2.1.2 药品和试剂
• 2.1.3 主要仪器
• 2.2 主要试剂配置
• 2.3 方法
• 2.3.1 糖尿病心肌病（DCM）大鼠模型制作
• 2.3.2 实验分组与干预
• 2.3.3 心脏超声诊断仪评价心功能
• 2.3.4 心肌组织Masson胶原特殊染色法及胶原容积分数（CVF）的测定
• 2.3.5 Tunel法检测各组心肌细胞凋亡
• 2.3.6 RT-PCR检测各组Ⅰ型、Ⅲ型胶原、ANP、BNP、P53 mRNA的表达
• 2.3.7 产物的电泳及结果分析
• 2.4 统计学分析
• 第3章 结果
• 3.1 实验动物情况
• 3.2 DCM模型组大鼠与正常组心脏结构及功能、病理学表现比较
• 3.3 DCM大鼠心肌组织中NRG-1/ERBB的MRNA表达的测定并比较
• 3.4 干预后DCM大鼠心功能测定
• 3.5 RT-PCR检测各组ANP、BNP MRNA表达
• 3.6 各组心肌组织MASSON染色法及胶原容积分数（CVF）的测定
• 3.7 RT-PCR检测各组Ⅰ、Ⅲ胶原纤维MRNA表达
• 3.8 RT-PCR检测各组P53MRNA凋亡相关基因的表达
• 3.9 TUNEL法检测各组心肌细胞凋亡
• 第4章 讨论
• 第5章 结论及展望
• 5.1 结论
• 5.2 展望
• 致谢
• 参考文献
• 综述
• 参考文献