平滑肌样细胞分化过程中Myocardin的表达及作用研究

论文摘要

背景:高脂血症是动脉粥样硬化（AS）最重要的危险因子,在高脂等因素所致的AS发生发展中,平滑肌细胞增生并合成细胞外基质是其重要环节。长期以来很多学者认为AS斑块中平滑肌细胞源于血管中膜平滑肌细胞的迁移和增生,然而近年研究证实抑制其迁移和增生并不能有效阻止AS的发生和发展。大量研究说明骨髓及外周血祖细胞可能参与了AS的形成。在平滑肌祖细胞向平滑肌细胞分化的过程中myocardin是迄今所发现的最关键的促血管平滑肌细胞分化因子,myocardin基因导入某些非平滑肌细胞后,激活了一系列平滑肌分化标志基因和蛋白的表达并使其向平滑肌细胞分化,用RNA干扰技术阻抑myocardin基因表达可降低平滑肌细胞特异激酶相关蛋白telokin启动子的活性,myocardin基因缺陷可导致胚胎鼠血管平滑肌细胞的分化完全被阻断,进一步说明myocardin为祖细胞向平滑肌细胞分化所必需。我们提出假设:骨髓及外周血平滑肌组细胞是AS斑块中平滑肌细胞的重要来源之一;在平滑肌祖细胞向平滑肌细胞分化,参与AS斑块形成过程中,myocardin起关键作用;myocardin基因表达可能影响AS形成,一旦抑制myocardin基因表达有可能控制AS斑块发生进展。目的:在用血小板源性生长因子-BB（PDGF-BB）联合20%胎牛血清（FBS）诱导骨髓间充质干细胞（BMSC）向平滑肌细胞（SMC）分化过程中,通过对促血管平滑肌细胞分化因子myocardin和平滑肌分化标志物基因α-actin, SM-22等表达的研究,探讨myocardin在促血管平滑肌细胞分化中的重要作用。同时比较PDGF-BB,20%FBS联合诱导与20%FBS单独诱导的作用有无区别。方法:采用骨髓干细胞培养基和贴壁法从小鼠骨髓中分离骨髓间充质干细胞,然后细胞分为两组诱导其向平滑肌细胞分化:（1）20%FBS单独诱导;（2）PDGF-BB（50ng/ml）联合20%FBS诱导BMSC。分别于诱导前,及诱导4天, 8天, 12天后用逆转录-聚合酶链反应法（reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR ）检测细胞myocardin,α-actin, SM-22的mRNA表达情况.以小鼠胸主动脉SMC作为阳性对照。结果:RT-PCR结果显示两诱导组细胞的myocardin,α-actin, SM-22的mRNA的表达情况为在诱导4天时比诱导前增强,诱导8天时比4天增强（P<0.05）,而诱导8天及12天时表达基本趋于稳定,与SMC相比无明显统计学差异（P>0.05）;并且myocardin,α-actin, SM-22的mRNA在PDGF-BB与20%FBS联合诱导时比20%FBS单独诱导表达增强。不同诱导组之间统计学比较有差异（P<0.05）.结论:骨髓间充质干细胞能够成功诱导为平滑肌样细胞,并且我们推断在此过程中myocardin对平滑肌样细胞的分化起着关键性作用;其分化过程受多种周围环境因素的影响。

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