DPC4/Smad4基因转染对胰腺癌细胞的抑制作用

论文题目: DPC4/Smad4基因转染对胰腺癌细胞的抑制作用

论文类型: 博士论文

论文专业: 普通外科

作者: 沈伟

导师: 李德春

关键词: 胰腺癌,基因治疗,逆转录病毒

文献来源: 苏州大学

发表年度: 2005

论文摘要: 第一部分DPC4/Smad4 在胰腺癌组织中的表达及意义检测胰腺癌组织和正常胰腺组织中DPC4/Smad4 的表达情况,探讨DPC4 基因在胰腺癌发病机制中的作用。本实验运用RT-PCR 和免疫组化技术,检测20 例胰腺癌和18 正常胰腺组织中的DPC4 mRNA 及蛋白的表达情况。实验发现,RT-PCR 检测胰腺癌组织中DPC4 mRNA 的阳性例数为8 例,阳性率为40%(8/20);正常胰腺组织的DPC4 的阳性表达率100%(18/18)。免疫组化显示癌组织中的弥漫阳性数为2 例,局灶阳性数为5 例,阳性表达率35%(7/20);正常胰腺组织的弥漫阳性数为8 例,局灶阳性数为10 例,阳性表达率100%(18/18)。两者比较有显著统计学差异(p﹤0.05)。结果提示DPC4 的失活可能与胰腺癌的发病有一定的关系,也许可作为胰腺癌患者一个临床诊断或预后的指标。第二部分DPC4/Smad4逆转录病毒载体pLXSN的构建运用PCR技术,从Smad4/DPC4-p Bluescript质粒中扩增出人全长DPC4/Smad4 cDNA片段,经测序鉴定准确无误后,利用分子克隆方法正向克隆到逆转录病毒载体pLXSN 中,获得正向单拷贝插入子pLXSN/DPC4+。以空载体pLXSN为对照,分别先后导入包装细胞GP+E86和PA317,经G418筛选,获取阳性抗性克隆,利用“乒乓效应”来提高病毒滴度。最终PCR证实GP+E86、PA317/ pLXSN DPC4 + 细胞中有外源性DPC4/Smad4 基因整合,而GP+E86、PA317/ pLXSN细胞中则没有;病毒滴度经检测为6.0×10~5 cfu/L,能够进行体外转染胰腺癌细胞。证实了将DPC4/Smad4基因导入逆转录病毒载体是一种行之有效的基因转移途径,分别导入包装细胞GP+E86和PA317细胞,进行交叉感染重组,可有效提高病毒滴度,可用来转染人源性胰腺癌细胞及其他恶性肿瘤细胞,为DPC4/Smad4基因治疗肿瘤创造了条件。第三部分DPC4/Smad4 基因转染对胰腺癌细胞的抑制作用构建表达野生型DPC4基因的逆转录病毒pLXSN载体,以空载体pLXSN为阳性对照,转染胰腺癌BxPC-3细胞株,经G418筛选,获取稳定表达DPC4基因的子代

论文目录:

引言

第一部分 DPC4/Smad4 在胰腺癌组织中的表达及意义

第二部分 DPC4/Smad4 基因逆转录病毒pLXSN 载体的构建

第三部分 DPC4/Smad4 pLXSN 载体对胰腺癌细胞的抑制作用

第四部分 DPC4/Smad4 pLXSN 载体联合化疗药物对胰腺癌细胞抑制功能的研究

结论

综述:胰腺癌基因治疗的途径和方法

缩略词表

学习期间发表和待发表文章及获奖情况

致谢

发布时间: 2006-03-24

参考文献

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