糖康对糖尿病视网膜病变的影响及其作用机制研究

论文摘要

目的:从视网膜微血管形态学和细胞分子两个水平,观察糖康对糖尿病大鼠视网膜病变的影响,并探讨其具体作用机制,为糖康防治糖尿病视网膜病变提供理论依据。方法:采用腹腔注射链脲佐菌素复制糖尿病模型,并随机分为正常对照组、模型组、糖康高、中和低剂量组和达纳康组,每日灌胃,定期检测大鼠体重和非空腹血糖。第12周末,消化铺片法观察视网膜微血管形态学改变;化学比色法检测各组大鼠血清及视网膜组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量。Western blot检测NF-κB亚基P65在视网膜组织细胞核内的含量。半定量RT-PCR检测其上、下游靶基因IL-1β、Bax和VEGF的表达水平。结果:经STZ诱发的糖尿病大鼠模型,造模一周左右即出现DM典型的“三多”症状。糖康高、中剂量组和与模型组相比,上述症状轻于模型组,而糖康低剂量组和达纳康组与同期模型组相比无明显变化;模型组与各治疗组大鼠较同期正常组大鼠体重明显降低（P<0.01）;正常组大鼠血糖保持稳定,模型组与各治疗组大鼠较同期正常组大鼠组血糖明显升高（P<0.01）;与正常组比较,模型组大鼠视网膜呈现较多的无细胞毛细血管条索数（约为正常组的12.16倍）。与模型组比较,糖康高、中、低剂量组和达纳康组无细胞毛细血管条索数明显减少（P<0.01）;与模型组比较,各治疗组大鼠血清及视网膜组织的SOD活性均不同程度升高,MDA含量均不同程度降低,以糖康高剂量组效果最为显著（P<0.01）;与正常对照组比较,模型组NF-κBP65蛋白表达水平明显上调（P<0.01）,各治疗组NF-κBP65蛋白在视网膜组织的表达不同程度降低,以糖康高剂量组最为显著;与正常组比较,模型组大鼠视网膜IL-1β、VEGF和Bax的mRNA表达明显上调（P<0.01）。与模型组比较,各治疗组大鼠视网膜IL-1β、VEGF和Bax的mRNA表达均不同程度降低,以糖康高剂量组最为显著。结论:用STZ诱发糖尿病大鼠模型是一种快速、简便、有效的动物模型制备方法,STZ最佳用药浓度为50 mg/kg;糖康能够改善DM大鼠的诸多糖尿病症状,但对血糖和体重改善不明显;糖康能够明显抑制糖尿病诱发的视网膜微血管细胞的凋亡和无细胞毛细血管条索数的增加,对糖尿病大鼠视网膜微血管具有一定的保护作用;糖康能够显著增加糖尿病大鼠血清及视网膜SOD活性,降低MDA含量,说明该药物具有清除糖尿病大鼠体内自由基,增强机体抗氧化防御能力,调节和改善自由基代谢的作用;糖康对糖尿病大鼠视网膜的保护作用可能与减少NF-κBP65在细胞核内的蛋白表达有关;糖康对糖尿病大鼠视网膜的保护作用可能与下调IL-1β、VEGF和Bax的基因表达有关。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略词表
• 第1章 绪论
• 1.1 活性氧的主要来源
• 1.1.1 线粒体
• 1.1.2 NADPH 氧化酶
• 1.2 氧化应激与信号转导通路
• 1.2.1 氧化应激与核因子NF-κB 信号通路
• 1.2.2 氧化应激与PARP 的激活
• 1.2.3 氧化应激与炎症反应
• 1.3 DR 的治疗现状
• 1.4 糖康的主要组成药物
• 1.5 研究目的和意义
• 第2章 糖康对 DM 大鼠视网膜微血管病理学的影响
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 方法
• 2.2 结果
• 2.2.1 DR 大鼠的成模率及各组死亡情况
• 2.2.2 DR 大鼠一般情况观察
• 2.2.3 不同时间点各组大鼠体重观察
• 2.2.4 不同时间点各组大鼠血糖观察
• 2.2.5 各组大鼠视网膜微血管形态学观察
• 2.3 讨论
• 2.3.1 糖尿病动物模型的选择
• 2.3.2 糖康对DM 大鼠全身情况的影响
• 2.3.3 视网膜微血管形态学观察及糖康对其的影响
• 第3章 糖康对 DM 大鼠血清及视网膜 SOD 活性与 MDA 含量的影响
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 方法
• 3.2 结果
• 3.2.1 各组大鼠血清和视网膜组织总SOD（T-SOD）活性比较
• 3.2.2 各组大鼠血清和视网膜组织MDA 含量比较
• 3.3 讨论
• 第4章 糖康对 DM 大鼠视网膜组织中 NF-ΚB 表达的影响
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 方法
• 4.2 结果
• 4.2.1 视网膜组织核蛋白SDS-PAGE 电泳
• 4.2.2 Western blot 检测视网膜组织NF-κBP65 蛋白表达
• 4.3 讨论
• 4.3.1 蛋白质的Western blot 分析
• 4.3.2 糖康对视网膜组织NF-κBP65 蛋白表达的影响
• 第5章 糖康对 DM 大鼠视网膜中 NF-ΚB 信号通路的影响
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 材料
• 5.1.2 方法
• 5.2 结果
• 5.2.1 视网膜总RNA 的提取
• 5.2.2 糖康对早期DM 大鼠视网膜组织Bax、VEGF 和IL-1βmRNA 的影响
• 5.3 讨论
• 第6章 全文结论
• 不足与展望
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历