论文摘要
蛋白酶抑制剂（Proteinase Inhibitor, PI）广泛存在于动植物和微生物中,能与相应的蛋白水解酶作用形成复合物，从而抑制蛋白酶的活性,参与体内许多重要生理过程的调节。其中胰蛋白酶抑制剂（Trypsin Inhibitor, TI）具有重要的药用价值,对于急性胰腺炎、肺气肿、多功能衰竭、抗休克、减少心脏外科手术中失血、防治脑水肿和脑缺血、预防早产、预防单侧肺缺血再灌注引起的损伤等方面都有相关的研究报道，最令人瞩目的是在HIV和肿瘤治疗中的应用。本文从60种具有抗病毒、清凉下火的传统中药中筛选具有胰蛋白酶抑制活性的组分，选取合适的原生药进行胰蛋白酶抑制剂的提取纯化及部分理化性质的研究。结果表明：60种中药配方颗粒中有7种在浓度为100mg/mL时对胰蛋白酶抑制率在15%以上，其中麻黄抑制率最大为37.95%，其次是大黄36.35%、鱼腥草28.03%、白芍23.15%、连翘18.66%、桂枝17.96%、凤尾草17.63%；有6种在浓度为50mg/mL时对胰蛋白酶抑制率在10%以上，其中大黄抑制率最大为32.73%，其次是鱼腥草16.51%、麻黄14.67%、白芍13.46%、连翘11.78%、细辛10.49%。其中有6种中药在两个浓度下对胰蛋白酶抑制率均在10%以上，包括麻黄、大黄、鱼腥草、白芍、连翘、细辛。选取鱼腥草作为研究对象，对其胰蛋白酶抑制剂（HCTI）进行了分离提取。实验结果表明：HCTI的最佳粗提取条件是采用pH7.0的双蒸水为提取溶剂，在加30倍体积水，温度为45℃条件下浸提2.0h，提取2次；粗提液经45%-60%饱和度的硫酸铵沉淀后比活力最高，用DEAE-52离子交换层析柱对HCTI进一步纯化， pH8.0Tris-HCL缓冲液为梯度洗脱液，在含240mM NaCl的梯度条件下可检测到HCTI活性峰。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，计算出HCTI的分子量约为28KDa。
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摘要Abstract第一章 文献综述1.1 蛋白酶抑制剂概述1.1.1 分类1.1.2 命名1.1.3 作用机理1.1.4 应用1.2 胰蛋白酶抑制剂的研究与应用1.2.1 胰蛋白酶抑制剂的研究现状1.2.2 胰蛋白酶抑制剂结构与功能的关系研究1.2.2.1 Serpin 的结构1.2.2.2 Serpin 的作用机制1.2.2.3 Serpin 的来源1.2.3 胰蛋白酶抑制剂的应用和前景1.2.3.1 TI 在农业上的应用1.2.3.2 TI 在临床上的应用1.3 药材概述1.4 论文研究的目的、意义及主要内容第二章 实验材料与方法2.1 实验材料、试剂及仪器2.1.1 材料2.1.2 试剂2.1.3 仪器2.2 实验方法2.2.1 具有胰蛋白酶抑制剂活性成份中药的筛选2.2.1.1 供试品溶液制备2.2.1.2 中药配方颗粒胰蛋白酶抑制剂活性测定2.2.2 鱼腥草胰蛋白酶抑制剂的粗提取2.2.2.1 提取胰蛋白酶抑制剂的最适溶剂确定2.2.2.2 提取胰蛋白酶抑制剂的最适溶剂体积的确定2.2.2.3 提取胰蛋白酶抑制剂的最适温度的确定2.2.2.4 提取胰蛋白酶抑制剂的最佳时间的确定2.2.2.5 提取胰蛋白酶抑制剂的最适提取次数的确定2.2.2.6 提取胰蛋白酶抑制剂的最适提取 pH 的确定2.2.2.7 各因素影响下提取工艺的优化2.2.3 鱼腥草胰蛋白酶抑制剂的分离纯化2.2.3.1 蛋白质浓度测定方法2.2.3.2 鱼腥草胰蛋白酶抑制剂活性测定方法2.2.3.3 硫酸铵分级沉淀2.2.3.4 鱼腥草胰蛋白酶抑制剂分离纯化2.2.3.5 鱼腥草胰蛋白酶抑制剂的分子量的测定第三章 结果与讨论3.1 具有胰蛋白酶抑制剂活性成份的中药筛选结果3.2 鱼腥草胰蛋白酶抑制剂的粗提取3.2.1 鱼腥草胰蛋白酶抑制剂提取液最适溶剂的确定3.2.2 鱼腥草胰蛋白酶抑制剂提取液最适体积比的确定3.2.3 鱼腥草胰蛋白酶抑制剂提取液最适温度的确定3.2.4 鱼腥草胰蛋白酶抑制剂提取液最适时间的确定3.2.5 鱼腥草胰蛋白酶抑制剂提取液最适次数的确定3.2.6 鱼腥草胰蛋白酶抑制剂提取液最适 pH 的确定3.2.7 药材提取工艺的优化3.3 鱼腥草胰蛋白酶抑制剂的分离纯化3.3.1 硫酸铵分级沉淀3.3.2 DEAE-52 离子交换分离纯化3.3.3 鱼腥草胰蛋白酶抑制剂的相对分子量的测定第四章 结论参考文献致谢附录
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