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细胞骨架在皮肤低温损伤中的重要作用及低温保护剂的相关研究

2020-11-22阅读(717)

细胞骨架在皮肤低温损伤中的重要作用及低温保护剂的相关研究

论文摘要

研究背景及目的:低温保存是低温生物学研究中的一项重要技术,近年来的迅速发展为临床医学带来了许多突破性的进展,现在速冻玻璃化已被认为是大多数生物组织低温下保存的最佳方法,但是如何进一步提高储存皮肤的活力,却一直没有得到非常满意的答案,其关键在于解决低温的损伤作用。已有学者认为组织低温保存后产生的效应包括细胞间和细胞质内部的改变,而且这些转变均可被细胞骨架系统所介导。但是,对于皮肤细胞骨架蛋白在低温冷冻损伤中的一些基础性研究和低温干预剂的相关保护性研究尚少。众所周知,皮肤的功能高度依赖于表皮的细胞骨架结构,任何损坏或使其功能降低的生物学行为将导致皮肤活力下降,在低温医学中充分认识和研究表皮细胞骨架结构的作用机制是非常关键的。本研究的目的旨在研究皮肤低温储存后表皮层细胞骨架蛋白的变化,从而分析其低温生物学效应,并将几种低温保护剂（Cryoprotectant, CPA）进行比较,以期为探索低温组织保存液的有效成分提供科学依据。 方法:在本论文的第一部分实验中,将皮肤组织采用不同的温度组（4℃组、-20℃组、-80℃组和-196℃组）进行保存,并在保存7天、14天、21天、28天后进行实验观察,设新鲜皮肤为对照组。首先通过H.E.染色和免疫组织化学染色两种病理学方法在光镜观察细胞形态和蛋白的改变,并用图像分析仪测定表皮组织中的含量变化。研究的骨架蛋白包括α-微管蛋白（α-tubulin）、β-微管蛋白（β-tubulin）、β-肌动蛋白（β-actin）、高分子量角蛋白（cytoskeratin<AE3>）。其次,采用透射电镜观察微丝、微管和中间丝的变化并进行图象分析。最后我们进一步采用RT-PCR和免疫印记法（Western-blot）对不同方法保存后的β-actin含量进行了深入的研究。力求从细胞骨架系统的重要组成部分中寻找到低温损伤的位点,从而寻觅更多关于抗低温损伤的机理。

论文目录

  • 英文缩写一览表
  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 第一部分 低温冷冻对皮肤细胞骨架蛋白的损伤作用研究
  • 前言
  • 实验一 低温冷冻对皮肤组织β-肌动蛋白表达的影响
  • 材料与方法
  • 一、实验材料
  • 二、主要试剂及仪器
  • 三、实验方法与观察指标
  • 四、图象分析
  • 五、统计学处
  • 结果
  • 讨论
  • 实验二 低温冷冻对皮肤组织微管蛋白和高分子量角蛋白表达的影响
  • 一、材料与方法
  • 二、结果
  • 三、讨论
  • 小结
  • 附图
  • 参考文献
  • 第二部分 海藻糖在皮肤低温储存过程中的保护作用研究
  • 前言
  • 实验一 海藻糖对低温保存皮肤后其活力的实验研究
  • 一、材料与方法
  • 二、结果
  • 三、讨论
  • 实验二 海藻糖对低温保存皮肤后β-肌动蛋白的实验研究
  • 一、材料与方法
  • 二、结果
  • 三、讨论
  • 小结
  • 附图
  • 参考文献
  • 文献综述
  • 综述一 低温保存皮肤的细胞骨架研究进展
  • 综述二 海藻糖在皮肤低温储存中的保护作用
  • 学习期间撰写及参写论文
  • 致谢

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