降压中药鬼针草中总黄酮的分离纯化及质量标准的建立

论文摘要

本文对治疗高血压有效的鬼针草总黄酮的提取工艺、初步除杂工艺及精制工艺进行了研究。得到一条合理的工艺流程,为鬼针草总黄酮的工业化生产奠定了基础;对鬼针草药材与总黄酮部位进行了定性、定量研究,并初步建立了鬼针草药材与总黄酮部位的质量标准。本实验以提取液中总黄酮的量为指标,用单因素实验确定正交实验的因素和水平,然后用正交设计法对影响提取效果的因素如乙醇浓度、乙醇用量、提取次数和提取时间进行考察,优化提取工艺。得出总黄酮的最佳提取工艺为12倍量80 %乙醇,连续提取3次,每次1.0 h。本实验对鬼针草总黄酮的初步除杂工艺进行了研究。对ZTCⅡ型天然吸附澄清剂的添加顺序、添加量、反应时间、反应温度和待澄清供试液浓度等单因素对澄清效果的影响进行考察。得到澄清剂的作用条件为澄清剂添加量B组分为120 mg/100 ml;A组分为60 mg /100 ml、反应时间为30 min、反应温度为40℃和待澄清供试液浓度为0.557 mg/ml。对鬼针草总黄酮的精制工艺进行了研究。以鬼针草总黄酮的吸附率和解吸率为指标,选择合适的大孔吸附树脂;以富集后总黄酮的纯度为指标,用正交设计法确定最佳纯化工艺条件。实验证明D-101型大孔吸附树脂对鬼针草总黄酮具有较好的吸附和解吸效果,其最佳工艺条件为:用浓度为4.378 mg/ml并且pH=6的药液在径高比为1:20的D-101型大孔吸附树脂制成的柱子上以2 BV/h的速度进行吸附,使大孔吸附树脂的比吸附量达11.8 mg/g。然后分别用4 BV的水和20 %的乙醇洗脱液洗脱,再用5 BV的70 %的乙醇溶液以同样的速度进行解吸。这样总黄酮的动态洗脱率达86.7 %,干膏中总黄酮的纯度由4.0 %提高到22.4 %,提高了5.5倍。对鬼针草总黄酮进行了进一步的精制。比较3种聚酰胺对鬼针草总黄酮的吸附率与解吸率,并从上样药液pH值、上样浓度、最大吸附容量、洗脱溶剂的选择等方面进行了考察。实验结果表明:60～80目聚酰胺对鬼针草总黄酮的吸附与解吸附较好,确定其最佳工艺条件为:浓度为2.0 mg/ml并且pH=6的药液在60-80目的聚酰胺柱子进行吸附,使聚酰胺的比吸附量达11 mg/g。先用纯化水洗脱除去极性较大杂质成分,洗至Molish反应（检测还原性糖）为阴性后,然后用6 BV的20 %的乙醇洗脱液洗脱;再用4 BV的30 %的乙醇洗脱液洗脱;最后分别用2 BV的50 %和70 %的乙醇洗脱液。收集30 %,50 %和70 %的乙醇洗脱液并分别浓缩制成干膏,测定富集后的总黄酮纯度。实验表明用聚酰胺进行进一步精制的方法优于溶剂萃取法（乙醚、氯仿、乙酸乙酯）,有较高的转移率和较好的富集效果。本文建立鬼针草及其总黄酮部位的质量标准,在定性研究方面,采用理化鉴别和微乳薄层对鬼针草药材和总黄酮部位进行鉴别研究。理化鉴别表明鬼针草的提取液中含有黄酮类成分,微乳薄层法可检出鬼针草药材和总黄酮部位中的芦丁和金丝桃苷。定量研究方面,应用UV分光光度法建立鬼针草药材与总黄酮部位中总黄酮含量的测定方法;应用HPLC法建立鬼针草总黄酮部位中芦丁含量的测定方法,以上含量测定方法经方法学考察符合有关规定。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一章 鬼针草总黄酮有效部位提取工艺的优化
• 1.1 材料、仪器与试剂
• 1.1.1 材料
• 1.1.2 仪器
• 1.1.3 试剂
• 1.2 方法与结果
• 1.2.1 理化鉴别
• 1.2.2 检测波长的选择
• 1.2.3 芦丁标准曲线的建立
• 1.2.4 鬼针草中总黄酮提取工艺考察
• 1.3 本章小结
• 1.4 讨论
• 第二章 ZTCⅡ澄清剂对鬼针草提取液澄清效果的研究
• 2.1 材料、仪器与试剂
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 仪器
• 2.1.3 试剂
• 2.2 方法与结果
• 2.2.1 澄清剂的配制
• 2.2.2 澄清剂的澄清试验
• 2.3 本章小结
• 2.4 讨论
• 第三章 大孔吸附树脂分离纯化鬼针草总黄酮的研究
• 3.1 材料、仪器与试剂
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 仪器
• 3.1.3 试剂
• 3.2 方法与结果
• 3.2.1 树脂的预处理
• 3.2.2 树脂的强化再生
• 3.2.3 黄酮供试液的制备以及标准曲线的绘制
• 3.2.4 静态实验
• 3.2.5 D-101、LSA-10 静态吸附动力学特性测定
• 3.2.6 泄漏曲线与吸附容量的考察
• 3.2.7 大孔吸附树脂对黄酮吸附的单因素实验考察
• 3.2.8 D-101 型大孔吸附树脂分离纯化鬼针草总黄酮工艺的优化
• 3.3 本章小结
• 3.4 讨论
• 第四章 聚酰胺分离纯化鬼针草总黄酮的研究
• 4.1 材料、仪器及试剂
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 仪器
• 4.1.3 试剂
• 4.2 方法与结果
• 4.2.1 聚酰胺树脂的预处理
• 4.2.2 黄酮供试液的制备
• 4.2.3 不同型号聚酰胺树脂的选择
• 4.2.4 上样药液pH 值的考察
• 4.2.5 上样药液浓度的考察（泄露曲线与最大吸附容量的考察）
• 4.2.6 洗脱溶剂的考察
• 4.2.7 上聚酰胺柱与用溶剂萃取法（乙醚、氯仿、乙酸乙酯）富集效果的比较
• 4.3 本章小结
• 4.4 讨论
• 第五章 鬼针草药材及其总黄酮部位质量标准的研究
• 5.1 材料、仪器及试剂
• 5.1.1 材料
• 5.1.2 仪器
• 5.1.3 试剂
• 5.2 鬼针草药材质量标准的研究
• 5.2.1 理化鉴别
• 5.2.2 鬼针草药材的薄层鉴别
• 5.2.3 鬼针草药材的总黄酮含量测定
• 5.3 鬼针草总黄酮部位质量标准的研究
• 5.3.1 理化鉴别
• 5.3.2 鬼针草总黄酮部位的薄层鉴别
• 5.3.3 鬼针草总黄酮部位的总黄酮含量测定
• 5.3.4 总黄酮部位中芦丁的含量测定
• 5.4 本章小结
• 5.5 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 作者简介
• 致谢