裂褶菌液体发酵条件及发酵产物的药理活性研究

论文摘要

裂褶菌Schizophyllum Commune Fr．是一种源自俄罗斯民间的珍稀大型真菌，被广泛用于防治疑难杂症，特别是癌症。近年来，对于它的化学成分和药理作用的研究已经日益引起国内外研究人员的重视，但是桦褐孔菌大规模的人工驯化还没有实现，其来源主要是靠采集，这使桦褐孔菌的开发利用受到了限制，而液体发酵培养恰能弥补这一不足。本实验通过液提深层发酵获得菌丝体，研究了菌丝体和发酵液的药理作用，主要包括其体外抑菌作用，胞外粗多糖的抗肿瘤活性及其机理和粗多糖的抗肿瘤活性，胞内（外）粗多糖的抗炎作用，并对胞内多糖的提取工艺进行了研究。1．本文所得结果表明，裂褶菌液体发酵的最适培养基配方为：葡萄糖20g、玉米粉50g、KH2PO4 3．0 g／L、MgSO4 1．5 g／m。当培养温度为28℃，摇瓶装量30％，转速120r／min，液体菌种接种量12％，摇瓶培养时间11天时所得菌丝干重最大。2．本文采用纸片扩散法和菌饼法对裂褶菌菌丝体及发酵液的抑菌活性进行了初步研究。利用4种细菌：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鼠伤沙门氏、肠炎沙门氏做指示菌，结果显示裂褶菌菌丝体及发酵液均能抑制4种指示菌的生长，说明裂褶菌的菌丝体及发酵液中均含有抑菌活性成分，其菌丝体的抑菌活性成分主要在正丁醇提取物中。3．本文利用正交实验分别研究了水提取，超声提取和微波提取裂褶菌菌丝体多糖的最优工艺。根据极差分析确定了热水浸提法的最优工艺为浸提时间4小时、浸提5次、液料比50、浸提温度90℃多糖提取率为13．45％；微波提取法的最优工艺为微波处理20min、液料比60、提取4次，提取率为10．8％；超声提取法的最优工艺为超声40min、提取4次、液料比60、温度50℃、频率70Hz，提取率为19．53％。用超声波法和醇沉法分别提取了菌丝体和发酵液中的粗多糖，其粗多糖得率分别为：每100g干菌丝体得18．85g粗多糖；每1000ml发酵液得7．76g粗多糖。用苯酚硫酸法测定菌丝体和发酵液粗多糖中多糖含量为78．42％，64．63％。4．初步研究了裂褶菌胞外粗多糖对实体瘤小鼠及腹水瘤小鼠肿瘤的抑制作用。以空白对照组生理盐水，阳性药组复方环磷酰胺，给药组裂褶菌的胞外粗多糖（高剂量组：500mg／kg，中剂量组：250m／kg，低剂量组125mg／kg）对小鼠肉瘤S180和肝癌H22的抑瘤率进行了初步研究，以胸腺指数和脾脏指数为指标对综合考察裂褶菌胞外粗多糖的高抑瘤活性和低毒性特征，并测得了肿瘤小鼠血清中IL-18和TNF-α的含量，简单说明了裂褶菌胞外粗多糖抗肿瘤的作用机理。胞外粗多糖对肉瘤S180小鼠的抑瘤率，中剂量组最高可达到49．03％，低剂量组次之为36．41％，对于肝癌H22的抑瘤率，中剂量组最高可达51．54％，低剂量组次之为42．29％，高剂量组也可达到35．62％，说明裂褶菌的胞外粗多糖能有效抑制肉瘤S180小鼠和肝癌H22小鼠的肿瘤生长，且给药组的胸腺指数和脾脏指数均明显高于空白对照组，说明裂褶菌胞外粗多糖在一定程度上能增强机体的免疫能力。两种肿瘤小鼠血清中IL-18和TNF-α的含量均有提高，这在另一层面上说明裂褶菌胞外多糖主要是以提高机体免疫力而起到抗肿瘤作用的。对腹水瘤小鼠肉瘤S180和肝癌H22的生命延长率的研究结果表明裂褶菌胞外粗多糖能明显延长腹水瘤小鼠的生存时间，对肉瘤S180小鼠平均能延长1．08d，对肝癌H22小鼠平均能延长2．78d。5．采用与胞外粗多糖同样方法对裂褶菌的胞内粗多糖进行了抗肿瘤活性研究，结果表明胞内粗多糖的三个剂量组对小鼠肉瘤S180和肝癌H22的生长均有明显的抑制作用。胞内粗多糖对肉瘤S180小鼠的抑瘤率高剂量组最高达48．28％，中剂量组次之为39．85％，低剂量组也可达35．25％，对肝癌H22小鼠的抑瘤率高剂量组最高达40．71％，中剂量组次之为35．50％，低剂量组也可达33．21％，说明裂褶菌的胞内多糖对小鼠肉瘤S180和肝癌H22的生长有明显的抑制作用；且给药组的胸腺指数和脾脏指数均明显高于空白对照组，说明裂褶菌胞内粗多糖能增强小鼠机体的免疫能力。6．以空白对照组生理盐水，阳性药组消炎痛（10m／kg），给药组裂褶菌的胞内粗（外）多糖（高剂量组：500mg／kg，中剂量组：250mg／kg，低剂量组125mg／kg）对二甲苯至小鼠耳肿胀抑制作用进行了初步研究。结果表明裂褶菌胞内粗（外）多糖对二甲苯至小鼠耳肿胀均有极显著的抑制作用，且在一定程度上提高了小鼠的免疫能力。其中裂褶菌的胞内粗多糖高、中、低剂量组的肿胀抑制率分别为34．43％，22．68％，16．44％；裂褶菌的胞外粗多糖高、中、低剂量组的肿胀抑制率分别为；20．01％，31．09％，12．90％。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一章 文献综述
• 1.1 药用真菌的抑菌作用
• 1.2 真菌多糖研究现状
• 1.2.1 真菌多糖的提取方法
• 1.2.2 真菌多糖的药理作用
• 1.3 裂褶菌的研究现状
• 1.3.1 生物学特性
• 1.3.2 化学组成
• 1.3.3 开发价值
• 1.3.4 人工驯化
• 1.3.5 深层培养及提取工艺
• 1.3.6 裂褶菌多糖
• 1.4 展望
• 第二章 裂褶菌菌丝体液体发酵培养条件的研究
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 2.3 实验结果
• 2.4 讨论
• 第三章 裂褶菌菌丝体体外抑菌活性的研究
• 3.1 实验材料
• 3.2 实验方法
• 3.3 实验结果
• 3.4 讨论
• 第四章 裂褶菌多糖的提取方法及粗多糖的制备
• 4.1 实验材料
• 4.2 实验方法
• 4.3 实验结果
• 4.3.1 多糖的提取工艺
• 4.3.2 裂褶菌粗多糖提取物
• 4.3.3 裂褶菌粗多糖的含量测定
• 4.4 讨论
• 第五章 裂褶菌胞外粗多糖抗肿瘤及免疫作用研究
• 5.1 实验材料
• 5.2 实验方法
• 5.3 实验结果
• 5.3.1 裂褶菌胞外粗多糖的抗肿瘤作用
• 5.3.2 裂褶菌胞外粗多糖对小鼠免疫器官的影响
• 5.3.3 裂褶菌胞外粗多糖对肿瘤小鼠血清中免疫因子的影响
• 5.3.4 裂褶菌胞外粗多糖对小鼠腹水瘤的生命延长率的影响
• 5.3.5 裂褶菌胞外粗多糖急性毒性实验
• 5.4 讨论
• 5.4.1 裂褶菌胞外粗多糖抗肿瘤的免疫作用
• 5.4.3 裂褶菌胞外粗多糖对腹水瘤小鼠的生命延长率的影响
• 第六章 裂褶菌胞内粗多糖的抗肿瘤作用研究
• 6.1 实验材料
• 6.2 实验方法
• 6.3 实验结果
• 6.3.1 裂褶菌胞内粗多糖的抗肿瘤作用
• 6.3.2 裂褶菌胞内粗多糖肿瘤小鼠免疫器官的影响
• 6.4 讨论
• 第七章 裂褶菌粗多糖抗炎活性的初步研究
• 7.1 实验材料
• 7.2 实验方法
• 7.3 实验结果
• 7.3.1 裂褶菌粗多糖对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响
• 7.3.2 裂褶菌粗多糖对二甲苯致耳廓肿胀小鼠免疫器官的影响
• 7.4 讨论
• 第八章 结论
• 8.1 裂褶菌菌丝体液体发酵培养特性的研究
• 8.2 裂褶菌体外抑菌作用
• 8.3 裂褶菌多糖的提取工艺及粗多糖的制备
• 8.4 裂褶菌胞外粗多糖抗肿瘤及免疫作用
• 8.5 裂褶菌胞内粗多糖的抗肿瘤作用
• 8.6 裂褶菌粗多糖抗炎活性
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介