抗仔猪大肠杆菌病原性腹泻IgY抗体微胶囊的初步制备及缓释效果评价

论文摘要

肠毒素大肠杆菌（Enterotoxigenic Escherichia Coli:ETEC）感染引起仔猪腹泻肠道传染病。此病不仅严重影响仔猪的生长发育、而且导致高死亡率。由ETEC引起仔猪腹泻发病率约占引起仔猪腹泻病原的40%,其爆发严重危害养猪业的发展。本研究初步开发一种产毒素大肠大肠杆菌的IgY壳聚糖-海藻酸钠微胶囊,通过口服,被肠道吸收后,发挥被动免疫作用,对该病进行预防及治疗。1、将产肠毒素埃希氏大肠杆菌（ETEC）K88,K99,987P标准菌株混合,分别与油乳剂、蜂胶、氢氧化铝胶三种免疫佐剂混合,用该三种佐剂对随机分组的健康产蛋鸡进行首免、二免、三免间隔分别为14天（d）及31天（d）免疫,摸索卵黄抗体的消长规律。经过比较发现,以油乳剂作为免疫佐剂,对产蛋鸡进行首免、二免、三免间隔30d的免疫方案,能产生较高效价的IgY抗体,且维持时间较长。收集此IgY抗体,进行去脂纯化。选用水稀释法、氯仿抽提法,正辛酸-硫酸铵共沉淀法三种方法进行纯化效果的比较。以IgY纯化的效果、纯化后的活性、回收率、含量作为指标,发现以水稀释法进行去脂,硫酸铵除杂蛋白效果最为理想,价格低廉,适宜大规模生产。2、猪源大肠杆菌IgY壳聚糖-海藻酸钠（ACS）微胶囊制备条件的探讨,主要分为两部分:第一部分筛选成囊性好且膜强度适中,适合进行胃肠控释的壳聚糖-海藻酸钠的空白微胶囊最佳成囊条件,经单因素试验对主要影响成囊条件的两个因素:海藻酸钠及氯化钙的浓度进行筛选。并以影响微胶囊膜强度的因素为条件,以微胶囊经人工胃液（3h）-人工肠液（7h）膨胀系数为研究对象,进行正交实验L9（43）,初步确定成囊效果,缓释性最好的制备条件为:0.2-0.4%混合分子量的壳聚糖溶液中加入氯化钙（CaCl2）,使CaCl2的浓度为1-2%,并调节pH到4-6,1-3%海藻酸钠,反应时间15min,37℃晾干3h。第二部分,把IgY按上述条件进行包囊,研究该微胶囊对IgY的最大包封浓度,经测定IgY在壳聚糖.海藻酸钠微胶囊中的最高包封浓度为75%。3、肠毒素大肠杆菌IgY壳聚糖-海藻酸钠微胶囊经体外释放试验证实:IgY壳聚糖-海藻酸钠微胶囊,能在人工胃液（SGF）中（3h）对IgY起到良好的保护作用,在人工肠液（SIF）6h以内IgY的释放率可高达90%以上。结果说明IgY壳聚糖-海藻酸钠微胶囊能在胃肠环境中起良好的控释作用。对IgY壳聚糖-海藻酸钠微胶囊进行保存实验,发现在12个月的保存时间内能稳定地保存芯材的活性及蛋白含量。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 论文常用缩写词
• 第一章 文献综述
• 第一部分 卵黄抗体的研究进展
• 第二部分 微胶囊的研究进展
• 第三部分 本课题研究目的和意义
• 第二章 猪源大肠杆菌IgY的获得、纯化与稳定性检测
• 实验一 猪源大肠杆菌IgY的获得
• 1.材料方法
• 2.结果
• 3.分析与讨论
• 4.小结
• 实验二 IgY卵黄抗体的提取与初步纯化
• 1.材料与方法
• 2.结果
• 3.分析与讨论
• 4.小结
• 实验三 IgY稳定性评价
• 1.材料与方法
• 2.结果
• 3.分析与讨论
• 4.小结
• 第三章 口服肠溶型IgY壳聚糖—海藻酸钠微胶囊的制备
• 实验一 口服肠溶型壳聚糖-海藻酸钠空白微胶囊制备条件的筛选
• 1.材料与方法
• 2.结果
• 3.分析与讨论
• 4.小结
• 实验二 IgY壳聚糖-海藻酸钠微胶囊的初步开发
• 1.材料与方法
• 2.结果
• 3.分析与讨论
• 4.小结
• 第四章 IgY壳聚糖-海藻酸钠微胶囊的初步评价
• 实验一 IgY ACS微胶囊在人工胃液、人工肠液中的控释性能
• 1.材料与方法
• 2.结果
• 3.讨论与分析
• 4.小结
• 实验二 IgY ACS微胶囊常温下保存时间的初步评价
• 1.材料及方法
• 2.结果
• 3.分析与讨论
• 4.小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读论文期间发表论文情况