β-Eudesmol抗血管形成及抗肿瘤作用的研究

论文题目: β-Eudesmol抗血管形成及抗肿瘤作用的研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 药理学

作者: 马恩龙

导师: 王敏伟,木村郁子,池岛乔

关键词: 血管形成,内皮细胞,迁移,管状结构形成,肿瘤

文献来源: 沈阳药科大学

发表年度: 2005

论文摘要: 异常血管形成往往与某些病理状态，如肿瘤、炎症、缺氧状态及糖尿病视网膜病等有密切关系。本文考察了苍术（Atractylodes lancea risome）根茎的提取物—β-eudesmol体内体外抗血管形成作用。体外抗血管实验结果表明：在无细胞毒剂量下，β-eudesmol（50-100μM）明显抑制猪脑皮层微血管内皮细胞（PBMECs）、人皮肤微血管内皮细胞（HBMECs）和人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）三种内皮细胞的增殖，但对大鼠主动脉平滑肌细胞（SMC）和新生大鼠脑星形胶质细胞（Astrocyte）的增殖无影响。β-eudesmol（50-100μM）可明显抑制生长因子刺激的内皮细胞的迁移：可抑制基底胶中内皮细胞管状结构的形成；对内皮细胞的黏附作用无明显影响。体内抗血管实验结果表明：β-eudesmol可明显抑制小鼠基底胶血管形成模型和小鼠炎性血管模型中的血管形成。抗血管形成作用机制研究表明：β-eudesmol（50-100μM）可抑制生长因子刺激的内皮细胞的增殖。在内皮细胞，β-eudesmol可阻断生长因子刺激的的ERK-MAPK的磷酸化，与之比较，β-eudesmol对生长因子刺激的的平滑肌细胞ERK-MAPK的磷酸化无影响。β-eudesmol（50-100μM）可阻断生长因子刺激的的CREB的磷酸化；但对另外二种血管形成调节蛋白—AKT和p38的磷酸化无明显影响；β-eudesmol对细胞内钙离子的含量也无明显影响。因而，推断β-eudesmol抗血管形成作用至少部分是通过阻断生长因子—ERK信号途径和生长因子—CREB信号途径实现的。我们选用三种肿瘤细胞—人宫颈癌HeLa细胞、人胃癌SGC-7901细胞及人肝癌BEL-7402细胞，考察了β-eudesmol体外抗肿瘤作用。结果表明，β-eudesmol体外可明显抑制三种肿瘤细胞的增殖；体内抗肿瘤试验结果表明，β-eudesmol（1.25-5 mg／kg）可剂量依赖型抑制小鼠H22和S180二种体内肿瘤模型肿瘤的生长，提示β-eudesmol具有一定抗肿瘤作用，体内抗肿瘤作用可能是由于直接抑制肿瘤细胞增殖及抑制肿瘤血管形成而实现的。根据以上结果，我们认为β-eudesmol是一个新的血管形成抑制剂，可能成为一个治疗血管形成相关疾病，特别是肿瘤疾患的治疗药物。

论文目录:

中文摘要

英文摘要

第一章绪论

一血管形成的过程

1 蛋白水解酶降解基底膜

2 内皮细胞在生长因子作用下的增殖、迁移和血管芽的形成

2.1 血管内皮细胞生长因子(VEGF)

2.2 碱性纤维芽细胞生长因子(FGF-2,bFGF)

2.3 血管生成素(Angiopoietins)

3 细胞黏附分子诱导的细胞-细胞和细胞-细胞外基质之间的反应

二血管形成调节的信号转导途径

1 生长因子-MAPK途径

2 生长因子-CREB途径

3 生长因子-PKB／AKT途径

三异常血管形成与疾病

1 血管形成与肿瘤生长和转移

2 血管形成与炎症

3 缺氧诱导病理血管形成

四血管形成抑制剂的研究进展

五 β-Eudesmol背景资料

第二章 β-Eudesmol体外抗血管形成作用研究

一实验材料

1 细胞及培养基

2 试剂

二实验方法

1 实验用原代细胞的分离、制备及培养

1.1 猪脑皮层微血管碎片的分离制备及培养

1.2 猪脑皮层微血管内皮细胞(PBMECs)的培养

1.3 大鼠主动脉平滑肌细胞(SMC)的分离制备及培养

1.4 新生大鼠脑星形胶质细胞(Astrocyte)的分离制备及培养

1.5 人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)的培养

1.6 人皮肤微血管内皮细胞(HBMECs)的培养

2 体外细胞增殖实验

2.1 β-Eudesmol对HUVEC增殖的影响

2.2 β-Eudesmol对PBMEC增殖的影响

2.3 β-Eudesmol对HDMEC增殖的影响

2.4 β-Eudesmol对SMC增殖的影响

2.5 β-Eudesmol对Astrocytes增殖的影响

3 细胞毒性分析实验

4 体外血管形成实验(Matrigel assay)

5 DNA合成实验

6 细胞黏附实验

7 细胞迁移实验

三实验结果

1 PBMEC鉴定结果

2 β-Eudesmol呈时间和剂量依赖性地抑制HUVEC的增殖

3 β-Eudesmol呈时间和剂量依赖性地抑制PBMEC的增殖

4 β-Eudesmol呈时间和剂量依赖性地抑制HDMEC的增殖

5 β-Eudesmol对大鼠SMC的增殖无影响

6 β-Eudesmol对大鼠astrocytes的增殖无影响

7 β-Eudesmol抑制生长培养基刺激的内皮细胞DNA的合成

8 β-Eudesmol抑制体外内皮细胞在matrigel内血管形成

9 β-Eudesmol抑制bFGF刺激的内皮细胞的迁移

10 β-Eudesmol对内皮细胞的黏附作用无影响

11 β-Eudesmol对内皮细胞无细胞毒作用

四讨论

五小结

第三章 β-Eudesmol体内抗血管形成作用研究

一实验材料

二实验方法

1 β-Eudesmol对小鼠炎性血管模型血管形成的影响

2 β-Eudesmol对小鼠matrigel血管形成模型血管形成的影响

三实验结果

1 β-Eudesmol可抑制小鼠炎性血管模型的血管形成

2 β-Eudesmol可抑制小鼠matrigel血管形成模型的血管形成

四讨论

五小结

第四章 β-Eudesmol抗血管形成作用机制研究

一实验材料

二实验方法

1 Western blot analysis(免疫印迹法)

1.1 工作液的配制

1.2 蛋白质电泳

1.3 免疫印迹

1.4 胞浆提取物的制备

2 β-Eudesmol对生长因子刺激的内皮细胞增殖的影响

3 细胞内钙离子测定

三实验结果

1 β-Eudesmol抑制bFGF刺激的内皮细胞ERK-MAPK的磷酸化

2 β-Eudesmol抑制VEGF刺激的内皮细胞ERK-MAPK的磷酸化

3 β-Eudesmol对生长因子刺激的大鼠主动脉平滑肌细胞ERK-MAPK的磷酸化无影响

4 β-Eudesmol抑制生长因子刺激的内皮细胞CREB的磷酸化

5 β-Eudesmol对生长因子刺激的内皮细胞p38的磷酸化无影响

6 β-Eudesmol对生长因子刺激的内皮细胞AKT的磷酸化无影响

7 β-Eudesmol对细胞内钙离子浓度无影响无影响

8 β-Eudesmol可以抑制生长因子刺激的内皮细胞增殖

四讨论

五小结

第五章 β-Eudesmol抗肿瘤作用研究

一实验材料

二实验方法

1 体外抗肿瘤作用

2 体内抗肿瘤作用

三实验结果

1 β-Eudesmol时间和剂量依赖性抑制和HeLa细胞生长

2 β-Eudesmol时间和剂量依赖性抑制SGC-7901细胞生长

3 β-Eudesmol体外时间和剂量依赖性抑制BEL-7402细胞生长

4 β-Eudesmol体内抑制小鼠肝癌H22的生长

5 β-Eudesmol体内抑制小鼠肉瘤S_(180)的生长

四讨论

五小结

缩略语

致谢

附录

简历

攻读博士学位期间发表论文

发布时间: 2006-12-14

参考文献

[1].慢周期肿瘤细胞的相关研究[D]. 孙青.北京协和医学院2013
[2].不同类型的巨噬细胞对肿瘤生长的影响及其机制[D]. 郭强.复旦大学2007
[3].乳酸在肿瘤适应葡萄糖缺乏中的作用及其机制研究[D]. 黄辰.上海交通大学2015
[4].超声微泡破坏抑制肿瘤生长及其作用机制研究[D]. 赵宗磊.南方医科大学2013
[5].基于介孔有机氧化硅的肿瘤多模式成像及其引导下的增效治疗[D]. 卢楠.南京大学2017
[6].肿瘤手术导航中图像分割与配准方法研究[D]. 赵丽亚.北京工业大学2016
[7].肿瘤诱导树突状细胞信号网络失调与功能变化关系[D]. 李锐.中国科学技术大学2015
[8].酯酶响应肿瘤细胞选择型基因输送体系应用于肿瘤基因治疗的研究[D]. 邱娜莎.浙江大学2016
[9].兔骨髓间充质干细胞对肿瘤局部免疫功能影响的实验研究[D]. 赵海锋.山东大学2008
[10].血小板促进肿瘤细胞转移的相关机制研究[D]. 张娜.北京协和医学院2009

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