论文摘要
MicoRNAs（miRNAs）是一类内源性表达的长约22个核苷酸的非编码单链RNA,在哺乳动物细胞中,miRNAs以非完全互补的方式与靶mRNA的3’非编码区（3’-untranslated region,3’-UTR）配对结合,从而引起翻译抑制或靶mRNA降解。当前研究表明miRNAs参与调节生物体各种生命活动,包括细胞增殖,分化,凋亡和迁移等[1]。正是因为miRNA几乎参与调节生命体全部的生理病理过程,近年的研究多集中于miRNA的异常表达与人类肿瘤发生发展的关系。大量实验结果显示人类肿瘤通常显示特征性的miRNA表达谱,表达异常的miRNA（升高或减低）在肿瘤的发生发展过程分别扮演致癌基因或抑癌基因的角色。尽管已有实验显示某些miRNAs与人类消化系统肿瘤相关,包括肝癌、结肠癌、胃癌、胰腺癌和胆管癌等[2,3],但这方面研究尚留有很大空白,特别是胃癌中异常表达的miRNAs。而中国恰恰是胃癌发病率最高的几个国家之一,因此我们选用胃癌作为研究对象,以期揭示胃癌中异常表达的miRNAs,并初步研究其功能。通过传统的生物芯片技术我们对胃癌中异常表达的miRNA进行筛选,芯片结果提示hsa-miR-542-5（miR-542-5p）在胃癌组织中高表达,进而采用Real-time PCR法对胃癌组织和正常远端胃组织中miR-542-5p的表达水平进行检测验证,从而确定miR-542-5p的高表达是否在胃癌中普遍存在。然后,我们采用Mann-Whitney Test和Kruskal-Wallis Test分析miR-542-5p表达水平与年龄、性别、肿瘤直径、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期、病理分型（Lauren、组织类型）的相关性。最后,我们综合计算机法（miRanda,Pictar,Targetscan）预测可能与胃癌有关的miR-542-5p的潜在靶基因。一、材料和方法:所有胃癌组织及配对正常远端组织均来源于胃癌手术病人,并进行病理确证。为了全面了解胃癌组织及其正常远端组织中miRNAs的表达情况,我们采用了含677个人类成熟miRNAs探针的芯片来检测胃癌组织及其正常远端组织中miRNAs的表达水平,并比较其差异。对miRNAs芯片结果进行分析筛选,选取上调最明显的目标miRNA在20对胃癌组织及其正常远端组织中用Real-time PCR进行验证。采用miRanda,Pictar,Targetscan预测miR-542-5p靶基因,并对这些潜在的靶基因做进一步分析。二、结果对生物芯片结果进行分析后发现,与远端正常胃组织相比,胃癌组织中miRNAs表达水平上调超过两倍的有6个,miR-542-5p,-125b,-199a,-10a,-199a*,-594,下调超过两倍的有11个,miR-182,-143,-194,-765,-200c,-192,-200b,-148a,-141,-215,-200a,其中上调最明显的是miR-542-5p,故我们选择miR-542-5p作为我们的研究对象。用Real-time PCR的方法在20例胃癌样本中检测miR-542-5p的表达水平,结果发现miR-542-5p在9例样本中上调,11例样本中下调。用SPSS13.0软件包对这20例胃癌样本中miR-542-5p表达水平和临床病理的相关性进行分析后发现,虽然miR-542-5p表达水平与病人的性别、年龄、肿瘤直径、浸润深度、Lauren分型无关,但miR-542-5p表达水平的改变与淋巴结转移（P=0.048,Mann-Whitney Test）,临床TNM分期（P=0.048,Mann-Whitney Test）和组织类型（P=0.018,Mann-Whitney Test）有关。有淋巴结转移胃癌组织与无淋巴结转移胃癌组织比较而言,前者的miR-542-5p表达水平上调;TNM分期为Ⅲ期和Ⅳ期的胃癌组织与TNM分期为Ⅰ期和Ⅱ期的胃癌组织比较而言,前者的miR-542-5p表达水平上调;此外,印戒细胞癌患者的胃癌组织中miR-542-5p表达水平与非印戒细胞癌患者的胃癌组织miR-542-5p表达水平相比,后者的miR-542-5p表达水平上调。对miR-542-5p潜在靶基因进行生物信息学分析,我们发现其中一些可能的靶基因与肿瘤的生长和转移有关,提示miR-542-5p可能参与胃癌的发生发展过程。三、结论尽管对20对胃癌样本的验证结果显示胃癌组织及其正常远端组织的miR-542-5p的表达水平无明显差异,但是结合各病例的具体情况,我们还是发现在一定的病理条件下,miR-542-5p的高表达还是与胃癌存在一定联系。就发生淋巴结转移的胃癌组织与无淋巴结转移胃癌组织比较而言,前者的miR-542-5p表达水平上调;TNM分期为Ⅲ期和Ⅳ期的胃癌组织与TNM分期为Ⅰ期和Ⅱ期的胃癌组织比较而言,前者的miR-542-5p表达水平也上调;印戒细胞癌患者的胃癌组织与非印戒细胞癌患者的胃癌组织比较而言,前者的miR-542-5p表达水平下调;以上均提示miR-542-5p表达水平的上调与胃癌转移及组织分化有关。值得一提的是,miR-542-5p潜在靶基因与肿瘤细胞生长、淋巴结转移、TNM分期等密切相关,我们推测miR-542-5p的表达水平可能成为判断胃癌进展及预后的一个分子标记物并具有潜在的致癌作用。我们将积累更多的胃癌组织样本对miR-542-5p表达进行验证,明确其异常表达是否与某一特殊类型病理的胃癌存在必然联系。
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