RNA干扰缺氧诱导因子-1α对人宫颈癌Hela侵袭能力影响的研究

RNA干扰缺氧诱导因子-1α对人宫颈癌Hela侵袭能力影响的研究

论文摘要

目的:研究RNA干扰缺氧诱导因子-1α对人宫颈癌Hela细胞中肌动蛋白表达及侵袭能力的影响,并初步探讨其间的信号通路。方法:1、细胞来源:将细胞分为H0(未转染质粒的HeLa细胞), H1(pGenesil-1空白质粒转染HeLa细胞)、H2(含HIF-1α-shRNA质粒转染的HeLa细胞)。2、分组:将H0、H1和H2细胞株分为实验组与对照组,分别在乏氧条件下(1% O2)及常氧条件下培养48h。3、检测方法:①.用Western blot检测各组细胞中HIF-1α、上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)、钙紧张素(β-catenin)和肌动蛋白(actin)的表达。②.以划痕试验和细胞侵袭实验来检测各组细胞的侵袭能力。③.免疫组化法检测移植瘤中HIF–1α、E-cadherin、β-catenin的表达。结果:1、Western blot结果分析:H0和H1组乏氧48h均检测到HIF-1α、E-cadherin、β-catenin、actin蛋白质条带, H2在乏氧48h和常氧状态下检测到E-cadherin、β-catenin和actin,常氧状态下H0、H1和H2组及乏氧48h下H2组均未检测到HIF–1α的表达。2、划痕实验证实:H2组侵袭能力明显减弱。3、免疫组化分析发现H1及H2组HIF-1、E-cadherin、β-catenin的表达有统计学意义(P<0.05),H0和H1组差异没有统计学意义。结论:RNA干扰HIF-1可通过抑制肌动蛋白的表达来抑制肿瘤细胞的侵袭,在这个过程E-cadherin-catenin复合体起了重要作用。

论文目录

  • 中文摘要
  • ABSTRACT
  • 前言
  • 材料与方法
  • 一、材料
  • 二、细胞株及分组
  • 三、裸鼠移植瘤模型的建立
  • 四、石蜡标本的制作
  • 五、免疫组化SP 法
  • 六、结果处理
  • 七、蛋白质的提取
  • 八、SDS-聚苯烯酰胺凝胶电泳
  • 九、细胞划痕实验
  • 十、细胞侵袭试验
  • 十一、统计分析
  • 结果
  • 一、划痕试验结果分析
  • 二、侵袭试验结果分析
  • 三、免疫组化结果分析
  • 四、图像分析
  • 五、WESTERN BLOT 结果示
  • 讨论
  • 一、HIF-1Α
  • 二、细胞骨架
  • 三、HIF-1 与肿瘤侵袭转移
  • 参考文献
  • 附录 乏氧对细胞骨架蛋白在肿瘤转移中的作用的研究进展
  • 参考文献
  • 致谢
  • 相关论文文献

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