NCPP对小鼠免疫增强作用及机理的研究

论文摘要

巨噬细胞在机体非特异性免疫和特异性免疫中起重要作用,它是参与免疫调节的重要细胞。单核/巨噬细胞系统除具有吞噬功能,还可发挥抗原呈递（antigen presentation）作用,属于抗原呈递细胞（antigen-presentation cell, APC）,可辅助T淋巴细胞活化,并与淋巴细胞相互刺激发挥免疫调节作用。巨噬细胞也是机体抗肿瘤免疫中的重要效应细胞。巨噬细胞的抗肿瘤作用具有选择性,即仅杀伤瘤细胞而不杀伤正常细胞,其杀伤效应与肿瘤的抗原结构及瘤细胞增生周期无关,且可杀伤对化疗、放疗呈抗性的肿瘤细胞。另外,只有激活的巨噬细胞才可发挥抗瘤效应。IL-1能促进B淋巴细胞分泌抗体,T淋巴细胞表达IL-2受体,并分泌大量IL-2,还能增强NK细胞的杀瘤活性等。TNF-α及NO是激活的巨噬细胞杀伤肿瘤细胞的主要效应分子。Klostergaard等发现,巨噬细胞杀伤肿瘤细胞至少存在两种机制:即TNF-α介导的杀伤机制和NO介导的杀伤机制,两者具有协同作用。TNF-α可通过诱导肿瘤细胞调亡及抑制肿瘤血管形成,导致肿瘤出血坏死等途径发挥作用;NO则使肿瘤细胞三羧酸循环中的乌头酸酶DNA合成的限速酶及核糖核酸还原酶失活,而最终导致肿瘤细胞死亡。IFN-γ具有杀伤病毒和肿瘤的作用,诱导单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞等MHCⅡ类抗原的表达,使其参与抗原提呈和特异性免疫的识别过程。协同诱导TNF并促进巨噬细胞杀伤病原微生物。IFN抗肿瘤的机理可能是:抑制肿瘤细胞增殖;诱导NK、CTL等杀伤细胞,并协同IL-2增强LAK活性;诱导肿瘤细胞表达MHCⅡ类抗原,增强对杀伤细胞的敏感性。 短棒状杆菌（Corynebacterium Parvum, CP）制剂（CPP）是一种非特异性免疫增强剂,它是用从健康人骨髓中分离的一种厌氧革兰氏阳性杆菌经甲醛灭活制成的死菌苗。CPP促进机体免疫反应和抗肿瘤疗效已被许多实验及临床研究所证实,尤其在消退癌性胸水方面具有独特疗效。CPP抗肿瘤作用主要是通过对单核巨噬细胞系统强大而持久的刺激,引起Mφ增生、活化、吞噬功山东大学硕士学位论文能增强及诱导分泌肿瘤坏死因子（TNF一Q）、干扰素（IFN）、白细胞介素（IL）、活性氧（HZOZ、NO）等癌细胞杀伤因子及增强NK细胞杀伤活性,达到抑制和杀伤肿瘤细胞的目的。分子免疫研究的进展加深了人们对免疫系统抗肿瘤功能及免疫治疗作用重要性的认识。目前,CPP可以说是激活M小活性最好的制剂之一,但副作用较大限制了其临床应用。若能利用现代高科技手段制备出疗效好、副作用低的新制剂,将有着重要的应用价值。为此,我们在对CP进行深入研究的基础上,利用先进的纳米技术,制备出了无细胞短棒状杆菌纳米级制剂（NCPP）。新制剂不但完全具备CPP的抗肿瘤活性,且副作用明显低于CPP。本文进一步研究了NCPP增强免疫的作用及其机理,为进一研究其抗肿瘤作用提供理论依据。 方法 1.NCPP是通过采用纳米技术破碎CP,经离心去除无效的上清部分,收集沉淀部分制备的新制剂。 2.将小鼠随机分为3组,分别为NCPP组、CPP组及对照组。3组小鼠分别在腹腔注射NCPP、CPP和生理盐水第10天时处死并分别称体重和脾重,计算脾指数。 3.将小鼠随机分为NCCP实验组、CPP实验组和对照组,三组小鼠腹腔注射艾氏腹水癌细胞,于注射癌细胞前1天及注射后次日起,连续（间隔1天）腹腔分别注射NCPP、CPP和生理盐水5次,计算小鼠存活率。小鼠腹腔注射NCPP、CPP或生理盐水10天后,分别测定腹腔巨噬细胞（M中）吞噬率、吞噬指数、过氧化氢（H202）、一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子（TNF）、干扰素（IFN）、白细胞介素（IL）等细胞因子水平、脾脏自然杀伤（NK）细胞杀伤率及T细胞增殖指数。 结果: NCPP组和CPP组与对照组相比均有明显的抑瘤作用;脾指数均大于2.0;腹腔M中吞噬率、吞噬指数、产生HZOZ、一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子（TNF）、干扰素（IFN）、白细胞介素（IL）等细胞因子的量均有显著的提高（P<0.01）;山东大学硕士学位论文脾脏NK细胞杀伤率也均有明显提高（P<0.05）;但脾脏T细胞增殖指数均无明显差异（P>0.05）。上述所有实验中,NCPP和CPP两组间均无明显差异（P）0.05)。表明NCPP具有与CPP相同的脾激活及抑瘤作用,其机理可能是通过强力激活M小及入K细胞吞噬、杀伤功能所致。NCPP的毒性低于CPP。 结论 NCPP与CPP具有相同的作用,能激活巨噬细胞、NK细胞等免疫效应细胞,使之分泌多种细胞因子及重要介质。它们能有效地增强机体的免疫效应,可引起免疫小鼠脾脏肿大,巨噬细胞增殖加快,腹腔巨噬细胞明显增多,吞噬功能明显增强,并能增强NK细胞杀伤活性,从而达到抑制和杀伤肿瘤细胞和病原微生物的目的。因NCPP的副作用远低于CPP,可望成为一种较好的肿瘤治疗剂。 [关键词]短棒状杆菌免疫调节剂巨噬细胞纳米技术

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