水牛胚胎分割的初步研究

论文摘要

本研究主要探讨水牛桑椹胚去致密化、分割液、分割方法和胚胎发育时期对胚胎分割效果的影响及取样胚冷冻的可行性。借助显微操作仪，将体外受精的水牛桑椹胚（第5d）和囊胚（第6～7d）分割，体外培养半胚，观察其发育情况。结果发现：1)水牛桑椹胚经去致密化处理分割，其分割成功率（68.0％VS50.6％）和囊胚发育率（57.9％VS41.0％）均显著高于未处理组（P＜0.01），囊胚细胞数差异不显著（P＞0.05）；2)在PBS+0.2 M S组与PBS+5％PVP组中分割桑椹胚，其分割成功率显著高于PBS组（71.67％、67.26％VS55.44％）（P＜0.05），而半胚的囊胚发育率及囊胚细胞数三者均无差异显著性（P＞0.05）；在PBS+0.2 M S与PBS+5％PVP中分割囊胚，其分割成功率显著高于PBS（79.13％、76.73％VS65.25％）（P＜0.05），而半胚培养的囊胚发育率及囊胚细胞数三者差异均无显著性（P＞0.05）；3)用直接分割法和单臂分割法分别分割桑椹胚和囊胚，其分割成功率（70.76％VS71.49％，79.02％VS80.77％）、囊胚发育率（57.27％vs57.60％，67.26％VS68.94％）和囊胚细胞数三者均无显著差异性（P＞0.05）；4)早期囊胚的分割成功率显著高于桑椹胚和扩展囊胚的（84.17％VS72.96％、76.06％）（P＜0.05），囊胚发育率也显著高于桑椹胚（74.99％VS58.31％）（P＜0.05），也稍高于扩展囊胚的（74.99％VS68.83％）（P＞0.05）。而三者的囊胚细胞数差异不显著（P＞0.05）；5)取样胚和整胚冷冻-解冻后的存活率（34.9％VS66.7％）和孵化囊胚率（13.9％VS29.4％）均差异极显著（P＜0.01）。结果表明：1)水牛桑椹胚去致密化有利于分割后胚胎的成活和发育；2)在PBS中分别添加0.2M的蔗糖和5％的PVP有利于提高水牛桑椹胚和囊胚的分割成功率；3)直接分割法和单臂分割法均适合于水牛桑椹胚和囊胚的分割；4)相对桑椹胚和扩展囊胚而言，水牛早期囊胚更适合于分割；5)水牛囊胚经取样后冷冻-解冻其成活率虽低于整胚，但仍可正常发育孵化至囊胚。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 哺乳动物胚胎分割技术研究进展（文献综述部分）
• 第一节 前言
• 第二节 胚胎分割技术的研究简史
• 第三节 胚胎分割的原理
• 第四节 胚胎分割方法
• 第五节 分割胚的发育
• 第六节 分割胚的培养
• 第七节 影响分割胚发育的因素
• 第八节 胚胎分割技术的应用
• 第九节 切割胚的冷冻
• 第十节 存在的问题与展望
• 第二章 水牛胚胎分割的初步研究（试验部分）
• 第一节 前言
• 第二节 材料与方法
• 第三节 试验结果
• 第四节 分析与讨论
• 第五节 结论
• 参考文献
• 附录
• 图片与说明
• 致谢
• 攻读学位期间发表论文情况