论文摘要
为了梅花鹿（Cervus nippon）的保护管理和养鹿业的可持续发展,本文研究了梅花鹿MHC-DRB基因的遗传特性,分析了它在3个圈养梅花鹿群体中的多态性,探讨了它作为辅助梅花鹿遗传管理的分子标记的可行性。得到以下结果:1.比较了传统的梅花鹿DRB基因方法PCR-SSCP-cloning sequencing与新设计Motif specific-PCR-SSCP-direct sequencing的方法。结果表明传统的方法中出现了28例点突变和7例重组的假阳性等位基因,而新方法能完全消除假阳性序列。2.确定了15个DRB等位基因（Ceni-DRB1～Ceni-DRB15）,这些序列中有34.9%核苷酸位点和49.4%氨基酸位点是多态的。由单一个体具有2-5个等位基因推测梅花鹿存在2个以上的DRB基因座。并首次发现梅花鹿与马鹿间共享1个DRB等位基因（Ceni-DRB14同于Ceel-DRB45）。两个物种之间另有2个等位基因（Ceni-DRB5与Ceel-DRB35）只有1个核苷酸（1个氨基酸残基）的差异。3.建立了Allele-specific PCR方法,它可以简便、快速检测梅花鹿个体的DRB基因型。新设计了14个引物（上游引物10个,下游引物4个）,引物的有效性检测证实它们的特异性。该方法的建立为梅花鹿的保护遗传学中DRB基因的研究提供了技术支持。4.运用Allele-specific PCR方法,分析了松花湖、西丰和兴凯湖梅花鹿群体中DRB基因的多态性。结果表明3个群体都只含有10个DRB等位基因,其余5个等位基因只在10份肌肉样品中出现。且同一等位基因在不同群体中出现的频率差异显著。在松花湖梅花鹿群体中发现了12种DRB基因单倍型,而西丰和兴凯湖梅花鹿群体中都有14种单倍型。5.梅花鹿DRB基因与产茸性状的相关分析表明,DRB3与二杠茸产量呈显著正相关（R=0.376,P＜0.01）,而DRB8和DRB11与二杠茸产量均呈显著负相关（R=-0.403和-0.445,P＜0.01）。在兴凯湖群体中,DRB2与三叉茸产量呈显著负相关（R=-0.27,P＜0.05）,具有等位基因世系类型1个体的产茸量显著大于杂合型个体（平均产量高14%,P＜0.05）。而在松花湖和西丰梅花鹿群体中没有等位基因与三叉茸产量间存在相关性,等位基因世系类型问也不存在显著的差异。另外,3个鹿群组合后发现具有111单倍型个体的产茸量显著低于11111单倍型个体（平均产量低15%,P＜0.05）。依据上述结果的分析,得出如下结论:1.新建立的Motif specific-PCR-SSCP-direct sequencing方法可以对梅花鹿DRB基因进行精确分型,该方法检测到15个梅花鹿DRB等位基因,其中13个是新的等位基因。2.新建立的Allele-specific PCR方法可以对梅花鹿DRB基因进行简便而快速的分型。3.首次揭示梅花鹿有2个以上DRB基因座,首次发现梅花鹿与马鹿间共享1个DRB等位基因。4.梅花鹿圈养群体维持了较高的DRB基因的多态性,表明依据鹿茸表型的人工选择不能大幅度降低该基因的多态性。5.DRB基因对梅花鹿的二杠茸重量有明显的影响,但对三叉茸重量则不明显。6.MHC基因在免疫系统和鹿茸生长中均起作用,提示DRB基因可以作为圈养梅花鹿种群遗传管理潜在的分子标记。
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标签：梅花鹿论文; 产茸性状论文; 主要组织相容性复合体论文; 基因论文; 多态性论文; 等位基因论文; 分子标记论文;