壳聚糖缓释膜的制备及其对成骨细胞的毒性研究

论文摘要

【目的】探索壳聚糖缓释膜的制备及该膜的缓释、降解性能，并研究该膜对成骨细胞的毒性作用。【材料和方法】1．以24小时溶胀度为评价指标，设计单因素试验和正交试验，确定出制备壳聚糖缓释膜的最佳参数组合，各参数的选择范围为：稀醋酸浓度0.5％、1％、1.5％、2％；壳聚糖浓度1mg／ml、2mg／ml、4mg／ml、8mg／ml；三聚磷酸钠（STPP）浓度4％、6％、8％、10％；交联时间为0.5h、1h、1.5h、2h。2．用确定的最佳参数制备壳聚糖缓释膜，并将牛血清白蛋白（BSA）作为蛋白质药物模型包入其中，用考马斯亮蓝法检测膜在第1、2、4、6、8天的释放率。把制备出的壳聚糖膜放入30ml含107U／L溶菌酶PBS缓冲液，将试管放入37℃的振荡培养箱中，分别于第1、2、3、4周测定其降解率。3．选取原代培养的胎鼠颅骨成骨细胞，用改良MTT法检测壳聚糖缓释膜对成骨细胞的毒性，试验设计有壳聚糖缓释膜的成骨细胞实验组、阴性对照组、空白对照组和阳性对照组四个组，以第0.5、1、2、3、5天为检测时间点。【结果】单因素试验通过测定24小时溶胀度，确定出稀醋酸的最佳浓度为1％，壳聚糖的最佳浓度为2mg／ml，三聚磷酸钠的最佳浓度为8％，交联时间最佳值为1小时。正交试验由于各因素间存在交互作用，选择四因素四水平的L16（44）正交试验，结果表明，当稀醋酸浓度取1％、壳聚糖浓度取2mg／ml、三聚磷酸钠浓度取6％、交联时间取1h时，膜的溶胀度最小。再将最佳参数组合与正交试验表中溶胀度最小的组进行验证试验，统计结果显示P＜0.05，差异有显著性，可确定正交试验所确定组合为最佳组合。释放率按最佳参数组合制备的壳聚糖缓释膜第1、2、4、6、8天的释放率分别为：20.1％、23.77％、26.44％、30.97％、33.13％。第1天释放的蛋白质量最多，而后随着时间的增加，BSA的释放量恒定增加。降解率壳聚糖缓释膜第1、2、3、4周的降解率分别为：13.67％、18.92％、22.35％、36.73％。壳聚糖缓释膜随着时间的增加，在PBS液中重量不断减少。细胞毒性实验与壳聚糖缓释膜直接接触的成骨细胞组第0.5、2、3、5天的相对增殖率均在100％以上，毒性分级为0级，无毒性；第1天的相对增殖率在90％以上，毒性分级为1级。对各组的吸光度值进行两两比较的LSD统计学分析，结果表明壳聚糖膜组与阴性对照组间吸光度值无统计学差异（P＞0.05），而阳性对照组或空白对照组与壳聚糖膜组或阴性对照组的吸光度值的差异都有显著性（P＜0.01）。【结论】（1）本研究经单因素试验和正交试验综合分析，当稀醋酸浓度取1％、壳聚糖浓度取2mg／ml、三聚磷酸钠（STPP）浓度取6％、交联时间取1h时，膜的溶胀度最小，最符合使用要求。（2）按最佳参数组合制备的含牛血清白蛋白（BSA）的壳聚糖缓释膜，8天内释放了BSA33.13％，且除第一天外有恒定的释放率，提示该膜具有良好的缓释能力。（3）采用溶菌酶对壳聚糖缓释膜进行体外降解实验，结果4周内壳聚糖缓释膜降解了36.73％，提示该膜具有良好的可降解性。（4）该膜对成骨细胞的细胞毒性试验结果为0级或1级，提示该材料有良好的生物相容性。

论文目录

• 英文缩写词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 论文正文
• 前言
• 实验一 壳聚糖缓释膜的制备和性能研究
• 引言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 实验二 壳聚糖缓释膜对成骨细胞的毒性研究
• 引言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢