论文摘要
目的:利用胞质分裂阻滞微核法、常规染色体畸变分析技术及HPRT 基因突变分析技术,分别从细胞、染色体和分子水平整体研究AT 细胞辐射敏感性;利用基因转染技术构建PEBS7-YZ5 稳定表达AT 细胞株,研究外源性ATM 蛋白对P53 蛋白的调控;以K562 细胞为P53 突变细胞模型,研究ATM 蛋白对P21 蛋白的直接调控,从而从信号传导通路角度,探讨AT 细胞高辐射敏感性的机制。方法:（1）以源于正常人皮肤的成纤维细胞系GM0639（GM 细胞）为对照,采用胞质分裂阻滞微核法,在AT 细胞和GM 细胞经（60）Coγ射线0、1、2、3、4Gy 照射后,观察比较AT 细胞和GM 细胞之间微核分布、微核率及微核细胞率的差异;（2）以GM 细胞为对照,用常规染色体畸变分析法,在AT5BIVA（AT 细胞）和GM 细胞经（60）Coγ射线0、1、2、3、4Gy 照射后,观察比较AT 细胞和GM 细胞之间染色体畸变率的差异;（3）以GM 细胞为对照,利用次黄嘌呤磷酸核糖转移酶基因位点突变分析技术,在AT 细胞和GM 细胞经（60）Coγ射线0、1、2、3、4Gy 照射后,观察比较AT 细胞和GM 细胞之间hprt 基因位点突变频率的差异;（4）利用电穿孔技术,将含有ATM 基因cDNA 的真核表达载体PEBS7-YZ5 转染到AT 细胞中,用潮霉素筛选以获得稳定表达细胞株,RT-PCR 检测ATM mRNA 的转录,Western blot进一步验证ATM 蛋白的表达;（5）利用免疫共沉淀及Western blot 技术研究在PEBS7-YZ5-AT 稳定转染细胞株中,表达的ATM 蛋白是否调控P53 蛋白的磷酸化,以明确ATM 基因与p53 的关系;（6）以p53 突变的K562 细胞为模型,利用免疫共沉淀及Western blot 技术研究ATM 蛋白与P21 蛋白的直接相互作用,探讨ATM 是否不通过P53 而直接调控P21 的磷酸化。结果:（1）经1、2、3、4Gy（60）Coγ射线照射后,在同一剂量点,AT 细胞单核、多核微核细胞率、微核率及微核细胞率均明显高于GM 细胞（P<0.01）,并且两者微核率及微核细胞率均与剂量呈正相关,均可拟合成剂量效应直线方程y=a+bx,AT 细胞微核率及微核细胞率直线回归方程斜率明显大于GM 细胞（P<0.01）;（2）在同一实验剂量下,AT 细胞染色体畸变率明显高于GM 细胞（P<0.05）,AT 和GM 细胞染色
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标签：毛细血管扩张性共济失调症论文; 高辐射敏感性论文; 基因论文;