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冬凌草甲素诱导U937细胞凋亡及增强吞噬凋亡小体的机制研究

2020-11-23阅读(846)

冬凌草甲素诱导U937细胞凋亡及增强吞噬凋亡小体的机制研究

论文摘要

本文对冬凌草甲素体外诱导人组织淋巴瘤U937细胞死亡机制及增强U937来源的吞噬细胞对紫外（UV）照射诱导的凋亡小体吞噬的机制进行了系统的研究。 实验结果表明，冬凌草甲素对U937细胞有明显的细胞毒活性，抑制细胞生长呈明显的时间和剂量依赖性。形态学方法、核荧光染色及DNA片段化分析实验证实了冬凌草甲素诱导U937细胞死亡机制为诱导细胞凋亡。 U937细胞对27μmol·L-1的冬凌草甲素及Fas激动型抗体CH11 500 ng／ml（作为细胞对Fas敏感性的阳性对照）表现为凋亡敏感性，在研究上游启动凋亡的caspase中，caspase 8特异性抑制剂z-IETD有效地阻断了冬凌草甲素诱导的细胞死亡和DNA片断化，但caspase 1特异性抑制剂Ac-YVAD和caspase 10特异性抑制剂z-AEVD对其没有影响。免疫印迹法显示Fas、FasL和FADD表达上调，caspase 8前体降解，提示Fas／FasL途径参与冬凌草甲素诱导的U937细胞凋亡。冬凌草甲素和CH11诱导ERK MAPK活化，然而ERK特异性抑制剂PD98059逆转了冬凌草甲素诱导的U937细胞死亡和caspase 8前体降解，说明ERK在caspase 8上游调控。另外，抑凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-XL表达降低，促凋亡蛋白Bax表达增加及细胞色素c释放，同时，caspase-3的酶原被降解，caspase-3底物ICAD（inhibitor of caspase activated DNase）和PARP（poly-（ADP-ribose）polymerase）降解。然而，PD98059逆转了冬凌草甲素对Bcl-XL、Bax和细胞色素c的影响，但对下调的Bcl-2表达没有作用。这些结果说明冬凌草甲素活化的Fas／FasL途径激活的ERK促进了U937细胞对线粒体途径诱导的凋亡敏感性。 1.35 gmol·L-1的冬凌草甲素具有增强U937分化的巨噬细胞对UV照射（52.1J／m2）诱导凋亡的U937细胞的吞噬作用，并呈时间剂量依赖性。加入抗TNFα和抗IL-1β的抗体，培养12h，吞噬增强作用明显受抑制，说明TNFα和IL-1β促进了冬凌草甲素增强的吞噬。另外，冬凌草甲素在人外周血来源的巨噬细胞吞噬凋亡死的U937细胞过程中同样发挥增强吞噬的效果。这些结果说明冬凌草甲素通过诱导TNFα和IL-1β释放增强U937细胞对凋亡小体的吞噬，这种作用可能有利于冬凌草甲素的抗肿瘤活性。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 第一章 绪论
  • 第一节 抗肿瘤药物的研究进展
  • 第二节 细胞凋亡及分子机制研究进展
  • 一、细胞凋亡的特征
  • 二、细胞凋亡的一些调控因素
  • 1.Caspase蛋白酶与细胞凋亡
  • 2.Bcl-2家族成员在细胞凋亡中的作用
  • 3.MAPK家族与凋亡
  • 三、细胞凋亡的信号转导途径
  • 1.死亡受体途径
  • 2.线粒体途径
  • 第三节 细胞凋亡的识别及吞噬机制研究进展
  • 一、吞噬细胞识别清除凋亡细胞的一般特征
  • 二、吞噬凋亡细胞的调控因素
  • 三、吞噬凋亡细胞的信号转导途径
  • 1.蛋白酪氨酸激酶途径
  • 2.磷酸肌醇-3激酶（PI-3K）途径
  • 3.小G蛋白途径
  • 4.转录因子NF-κB
  • 5.MAPK家族与吞噬的调节
  • 第四节 冬凌草甲素药理学研究概述
  • 1.抗菌作用
  • 2.抗肿瘤作用
  • 3.抗突变作用
  • 4.抗氧化作用
  • 5.镇痛作用
  • 6.其他作用
  • 参考文献
  • 第二章 冬凌草甲素诱导人组织淋巴瘤U937细胞死亡机制研究
  • 一、实验部分
  • 1.实验材料
  • 2.实验方法
  • 二、实验结果
  • 1.冬凌草甲素诱导U937细胞死亡呈明显剂量与时间依赖关系
  • 2.冬凌草甲素诱导U937细胞凋亡的形态学变化
  • 3.DNA电泳观察
  • 4.冬凌草甲素和激动型Fas抗体CH11对U937生长抑制作用比较
  • 5.Caspase 1、8、10抑制剂对冬凌草甲素诱导U937凋亡的影响
  • 6.冬凌草甲素对死亡受体复合物表达的影响
  • 7.MAPK家族、PTK和PKC对冬凌草甲素诱导U937细胞死亡的影响
  • 8.ERK抑制剂PD98059对冬凌草甲素诱导的FADD表达上调和caspase 8前体降解的影响
  • 9.Caspase 3的活化及其底物ICAD、PARP的切断
  • L和Bax表达及cytochrome c释放'>10.冬凌草甲素调节Bcl-2、Bcl-XL和Bax表达及cytochrome c释放
  • 11.PD98059对冬凌草甲素诱导的Bcl-2家族蛋白表达的影响及cytochrome c释放的影响
  • 三、讨论
  • 四、小结
  • 参考文献
  • 第三章 冬凌草甲素增强对凋亡小体吞噬作用的机制研究
  • 一、实验部分
  • 1.实验材料
  • 2.实验方法
  • 二、实验结果
  • 1.U937细胞经PMA处理分化为吞噬细胞
  • 2）诱导凋亡小体的形成'>2.UV照射（52.1J／m2）诱导凋亡小体的形成
  • 3.冬凌草甲素增强U937分化的吞噬细胞吞噬凋亡小体呈时间剂量依赖性
  • 4.吞噬的形态学观察
  • 5.内毒素抑制剂polymyxin B（PB）未影响冬凌草甲素诱导的吞噬刺激
  • 6.冬凌草甲素对U937分化的吞噬细胞吞噬红色荧光颗粒的作用
  • 7.加入抗体对冬凌草甲素诱导吞噬作用增强的影响
  • 8.冬凌草甲素对人外周血来源的巨噬细胞吞噬凋亡小体能力增强作用
  • 9.PTK抑制剂genistein对冬凌草甲素诱导的吞噬增强效果的影响
  • 10.PI3K,PKC和PLCγ抑制剂对冬凌草甲素诱导的吞噬刺激的影响
  • 11.在冬凌草甲素诱导的吞噬刺激的过程中PKC活力增加
  • 12.PLCγ2表达增加和PKB／Akt磷酸化的上调
  • 13.MAPK在冬凌草甲素诱导的吞噬刺激中的作用
  • 14.TNFα和IL-1β抗体对PKC活化和ERK磷酸化的影响
  • 15.Ras抑制剂manumycin A阻断了冬凌草甲素诱导的吞噬刺激
  • 16.Rafl kinase抑制剂对吞噬刺激的影响
  • 17.Ras／Rafl依赖性的ERK活化
  • 18.NF-κB活化
  • 19.NF-κB依赖的IL-1β前体产生
  • 三、讨论
  • 四、小结
  • 参考文献
  • 缩略语
  • 致谢
  • 附录

    • 相关论文文献

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