粘附分子STPB-C在小鼠精原干细胞发育中的作用

粘附分子STPB-C在小鼠精原干细胞发育中的作用

论文摘要

精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)是指未分化的A型精原细胞,是成体内可复制的多潜能双倍体细胞,在复杂且高度有序的精子发生过程中占据极其重要的地位。它一方面通过自我更新维持自身群体数目的稳定,另一方面能通过定向分化源源不断地形成各阶段的生殖细胞,最终产生成熟的精子。精原干细胞移植技术为研究精子发生机理,建立转基因动物等提供了重要工具。通过分离纯化供体动物精原干细胞,进行体外培养与转基因,最后将精原干细胞移植入雄性受体动物睾丸组织。移植的干细胞能够与宿主的睾丸支持细胞相互作用,使其定位于生精小管基膜上并开始增殖,最终通过受精产生转基因的后代。STPB-C是cadherin超家族的一个成员,最初认为它只在垂体和大脑中表达。近来的研究发现STPB-C在初生的幼体睾丸组织中也有较高的表达,沟通精原干细胞和Sertoli支持细胞之间信号通讯,对干细胞的发育和分化可能具有重要的调控作用。本研究通过体外分离与培养小鼠精原干细胞,构建STPB-C过表达载体与siRNA表达载体,体外转基因和精原干细胞移植,建立STPB-C过表达和基因沉默阳性小鼠,以研究STPB-C在小鼠精原干细胞发育及分化过程中的调控作用。结果显示,STPB-C过表达能有效的促进小鼠精原干细胞的短期体外快速增殖;STPB-C过表达和基因沉默可能导致阳性小鼠部分组织发生病变而使其在出生后发生死亡。另外,在实验中还发现STPB-C与细胞在体外培养时的贴壁性和接触抑制性相关。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 一 研究背景
  • 1.1 精原干细胞的特征
  • 1.2 精原干细胞的分离与纯化
  • 1.3 精原干细胞的体外培养
  • 1.4 精原干细胞的移植
  • 1.5 STPB-C 基因的介绍
  • 二 材料及方法
  • 2.1 试剂与仪器
  • 2.2 小鼠精原细胞的分离
  • 2.3 细胞培养、转染及保存
  • 2.4 si-RNA 表达载体的构建
  • 2.5 pFB-Neo-STPBC 病毒载体构建及重组病毒的收集
  • 2.6 RT-PCR
  • 2.7 SSCs 体外移植
  • 2.8 Southern blot
  • 三 实验结果
  • 3.1 小鼠精原干细胞的分离与培养
  • 3.2 pRN-STPB-C 转染F9 细胞和精原干细胞
  • 3.3 RT-PCR 检测STPB-C 的表达
  • 3.4 pFB-Neo-STPBC 转染SSCs
  • 3.5 转基因小鼠的检测
  • 四 讨论
  • 五 总结与展望
  • 六 参考文献
  • 致谢
  • 攻读硕士期间发表的论文
  • 相关论文文献

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