论文摘要
V-ATPase是多亚基复合酶,包含V1和V0两个亚单位,共12个亚基。V-ATPase参与多种重要的细胞内功能,如细胞酸化,受体介导的内吞作用,翻译后转运,以及某些特定的细胞器与质膜的融合等。V-ATPase的每种亚基对于全酶行驶功能都缺一不可。然而在高等植物尤其是模式植物拟南芥中鲜有对于V-ATPase及其亚基的研究或报道。本文首次对拟南芥V-ATPase V,部分的B亚基的功能进行了初步研究。拟南芥V-ATPase B亚基有三种亚型,即VHA-B1, VHA-B2, VHA-B3。1.本文利用GUS报告基因显示了V-ATPaseB亚基启动子的组织特异性表达,这三个亚型的启动子在子叶,根,雄蕊,花粉及花粉管等部位大量表达,暗示VHA-B亚基在这些部位可能具有重要功能。2.对于V-ATPase B亚基在拟南芥体内的功能研究采用过表达B亚基和T-DNA插入突变的方法。我们构建了CaMV35s和花粉特异启动子lat52启动表达目的基因过表达载体,通过潮霉素和YFP荧光检测筛选到VHA-B亚基过表达的植株,进一步进行表型观察,以揭示B亚基的过表达对拟南芥植株生长发育及生殖方面的影响。3. T-DNA插入突变体是研究植物基因功能的有效工具,我们对T-DNA插入VHA-B1, VHA-B2, VHA-B3亚基的突变体进行了纯杂合的鉴定,结果显示部分植株是T-DNA插入纯合体,部分是杂合体,对于纯合体,通过测序鉴定了T-DNA的插入位点,将在转录和翻译水平进一步验证,确定基因表达被抑制,然后进行表型观察；而杂合体将继续传代直至分离出纯合突变体。本课题揭示了植物体中V-ATPase B亚基启动子的组织与发育表达特异性,植物体在B亚基过表达或缺失时营养器官与生殖器官的变化,同时了解V-ATPase B亚基行驶其功能的分子机制,为研究V-ATPase提供更多的依据。