微囊化hES/293细胞生物学性状检测及其对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）作用的实验研究

论文摘要

目的：聚电解质络合法制作海藻酸钠-壳聚糖-海澡酸钠（ACA）微囊化人内皮抑素/293（human Endostatin/293,hES/293）细胞,检测不同密度ACA微囊化hES/293细胞体外培养状况下的生物学性状,及其对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的作用；比较微囊前后hES/293细胞生物学性状差异。方法：聚电解质络合法制作不同密度的ACA微囊化hES/293细胞,分为3组：A组低密度组,为1×104cells/ml组；B组中密度组,为1×106cells/ml组；C组高密度组,为1×108cells/ml组,每组6个样本,分别在实验观察的第1、3、7、14、35天,采用倒置显微镜观察、台盼兰染色计数不同密度微囊化细胞的细胞总数和存活率,MTT法测定微囊化hES/293细胞及微囊化hES/293细胞与HUVEC共培养后HUVEC生长状况、ELISA法检测上清液中目的蛋白的含量；流式细胞术检测微囊前后hES/293细胞细胞周期。结果：在实验观察的35天内,聚电解质络合法制作的三种不同密度的ACA微囊化hES/293细胞,囊壁透明球形,表面光滑,直径为500-700μm。1-3天内,细胞以单细胞形式均匀分布于囊内空间。7天以后,细胞逐渐聚集生长为大小不等的细胞团。三组微囊囊内细胞总数和活细胞数均随时间延长而增多,囊内细胞存活率均于第3天达最高,此后B组细胞存活率高于A、C组。三组细胞生长速率均于第7天达高峰,此后B组细胞存活率基本保持稳定,而A、C两组持续降低,并于第35天降至最低点。ELISA法检测三组微包囊上清液目的蛋白含量发现,B、C组第7天释放ES蛋白量达最高,分别为217.63±27.96ng/mL,179.74±10.64 ng/mL;B组第7天以后趋于稳定,直至第35天；A组在第14天分泌ES蛋白量达最高,为175.37±26.23 ng/mL,以后显著下降,第35天降至最低。三组ACA微囊化hES/293细胞与HUECV细胞共培养,第24小时,三组微囊化细胞对HUVEC细胞的增殖均未表现抑制作用,三组OD值分别与空白组比较,差异无统计学意义（p=0.536,0.620,0.151,0.901,0.397,0.334）；第72小时,三组OD值均较空白组低,差异有显著统计学意义（p=0.000,0.000,0.000）,其中,A组低于B、C两组,差异有统计学意义（p=0.022,p=0.006）；第120小时,三组OD值均较空白组低,差异有显著统计学意义（p=0.000,0.000,0.000）,其中, B组低于A、C两组,差异有统计学意义（p=0.040,p=0.002）。MTT法对一周内微囊化与非微囊化hES/293细胞检测发现,微囊化细胞在前3天生长缓慢,第5天以后生长速率基本上与非微囊化细胞相当。两组在1、3、5、7天的OD值无统计学差异（t1=0.267,p1=0.795；t3=1.923,p3=0.083；t5=-1.363,p5=0.203；t7=1.424,p7=0.185）；流式细胞术分析微囊化与非微囊化hES/293细胞的S期比例发现,第1天和第3天,两组细胞S期的百分含量差别不大（t1=1.061,p1=0.443；t3=0.676,p3=0.551）；培养至第7天时,微囊化细胞S期的百分含量高于非微囊化细胞,差别有统计学意义（t=2.725,p=0.034）；第14天微囊化细胞S期的百分含量仍然高于非微囊细胞（t=2.545,p=0.044）。结论：1.不同密度hES/293细胞制作ACA微囊可以影响hES/293细胞存活率,其中1X106cells/ml密度制作的微囊,囊内细胞存活率较高,生长较稳定。2.微囊化hES/293细胞可稳定释放ES蛋白,并可抑制HUVEC生长。3.微囊化hES/293细胞比非微囊化hES/293细胞有较高的增殖和代谢活性,且能较长时间保持此活性。

论文目录

• 1 微囊化hES/293细胞生物学性状检测及其对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）作用的实验研究
• 1.1 英汉缩略词对照表
• 1.2 中文摘要
• 1.3 英文摘要
• 1.4 前言
• 1.5 材料与方法
• 1.6 结果
• 1.7 讨论
• 1.8 结论
• 1.9 参考文献
• 2 微囊化人工细胞的研究进展（综述）
• 3 致谢