论文摘要
低聚糖是一种具有适用范围广和应用前景好的新型产品,它集营养、保健、食疗功能于一体,常应用于食品、保健品、饮料、医药、饲料添加剂等多个领域,其趋势是将取代蔗糖成为新型功能性糖源。麸皮中含有大量的纤维素和半纤维素,开发利用麸皮中的纤维素和半纤维素制备低聚糖是当前的一个研究热点,而利用酶法降解麸皮制备低聚糖的方法所具有的无污染、低能耗等优点将是麸皮资源开发利用的一个趋势。本实验通过对里氏木霉的深入研究,得出其产酶的最佳条件,并对酶进行初步的分离纯化,研究各个酶的酶学性质,同时对小麦麸皮进行必要的初处理,然后用里氏木霉产生的酶来降解处理后的麸皮,通过调节各种可能的影响因素,最大量的产生低聚糖。本实验室保藏的里氏木霉F0701是一种高产纤维素酶和半纤维酶的真菌,通过对该真菌的研究得出,在发酵过程中产生了纤维素酶系中的两组酶系,即Cx酶、C1酶,没有产生β-葡萄糖苷酶,另外还有木聚糖酶(Xylanase);优化获得该菌株最佳产酶条件:碳源为2‰麸皮、氮源为(NH4)2SO4,加入Tween20,培养液初始pH值4.5-5.0,在25-30℃下培养96-120h。然后对里氏木霉F0701发酵产生的降解酶进行初步分离纯化,并研究了它们的酶学性质,得出Cx酶、C1酶和Xylanase三种酶的最适反应温度为70℃、50℃和50℃,最适反应pH值分别为4.6、4.8和4.8,研究发现不同类型的无机离子对酶活有不同程度的影响,Cu2+、Mg2+、Fe2+对酶有促进作用,Mn2+、Tris、Ca2+对酶有明显的抑制作用;通过双倒数曲线法分别测出了三种酶的Km值,C1酶为27.92mg/ml, Cx酶为17.75mg/ml,Xylanase为25.59mg/ml。在对小麦麸皮进行去除淀粉、去除蛋白质等一些必要的处理后,用里氏木霉F0701所分泌的酶液对其进行发酵降解,并运用薄层色谱和高效液相色谱对产物进行分析,然后对降解时的底物浓度、反应时间、温度和pH值等等多种因素加以考虑,以寻找酶解的最佳工艺,最后我们得到酶降解处理后的麸皮的最佳条件是:1.5g的麸皮中加入30ml的酶液与pH=5.5缓冲液,在50℃下降解4h后即可停止反应。
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