肺心病患者血清对兔肺动脉内皮细胞的影响

论文摘要

目的 观察不同浓度肺心病患者血清对体外培养兔肺动脉内皮细胞DNA合成、损伤及乳酸脱氢酶（LDH）释放、一氧化氮（NO）合成、内皮素（ET）分泌的影响。为进一步深入了解肺心病的发生、发展提供帮助。 方法 内皮细胞的分离和培养参照Jaffe方法加以改进。用胶原酶Ⅰ消化兔肺动脉内皮细胞（Rabbit pulmonary artery endothelialcells,RPAECs）,用PRIM-含10%胎牛血清1640培养基培养、传代。分离得到内皮细胞（endothelial cell,EC）经倒置相差显微镜下观察血管内皮细胞形态,免疫组化检测内皮细胞特异性抗原鉴定内皮细胞。选择第4-6代EC进行实验。将血管内皮细胞与不同浓度（2.5%,5%,10%,15%,20%）肺心病患者血清培养基共同孵育12h,应用MTT比色法检测细胞的增殖情况;应用单细胞凝胶电泳技术检测RPAECs的DNA损伤程度;通过紫外连续检测法、放射免疫法、硝酸还原酶法分别检测细胞培养上清中LDH、ET、NO等指标观察RPAECs分泌功能的变化。 结果1.细胞增殖 高浓度肺心病患者血清对RPAECs细胞增殖有明显抑制作用,其中部分细胞脱落死亡,肺心病患者血清浓度越高,EC的DNA合成速度越慢,合成量越少,细胞增殖缓慢。2.单细胞凝胶电泳 经正常人10%浓度血清孵育的RPAECsDNA电泳图形显出圆晕现象,用肺心病患者10%浓度血清培养基孵育的RPAECsDNA电泳图形显示彗星现象,说明细胞DNA已发生断裂、损伤。3.肺心病患者血清浓度为2.5%时,LDH释放量与正常无差异（P>0.05）,但当浓度为10%、15%、20%时LDH释放水平上升,显著高于正常对照组（P<0.01）。4.肺心病患者血

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