黄芪当归复方的物质基础及其治疗肝纤维化的实验研究

论文摘要

中药色谱指纹图谱是中药（包括中药单味药与中药复方制剂）整体性的化学表征。联用仪器和色谱指纹图谱技术为阐明中药药效的物质基础研究提供了强有力的手段。本论文利用GC-MS、HPLC-DAD和HPLC-DAD-MS等联用色谱仪器和中药指纹图谱技术,结合能有效利用色谱和光谱/质谱信息的化学计量学方法,实现了对黄芪当归复方及其单味药化学组分的归属分析;考察了黄芪当归复方治疗兔血吸虫病肝纤维化的药效作用;建立了一种反相高效液相色谱方法快速测定尿羟脯氨酸的含量并讨论了其与肝纤维化程度的关系。利用联用色谱仪器和指纹图谱技术定性分析了黄芪当归复方中挥发性和非挥发性化学成分。利用GC-MS、HPLC-DAD和HPLC-DAD-MS联用仪器得到黄芪当归复方及单味药的色谱指纹图谱,结合紫外光谱、质谱数据进行定性和归属分析,发现当归和黄芪配伍组成当黄芪当归复方后,复方中的组分绝大部分来源于各单味药的化学成分,但含量有消长变化。这些变化的化学组分有待进一步的分析研究。研究了不同剂量黄芪当归复方对兔血吸虫病肝纤维化的药效作用。根据黄芪当归复方的益气补血功效,研究了不同剂量黄芪当归复方对兔血吸虫病肝纤维化的治疗作用。结合吡喹酮治疗兔血吸虫病肝纤维化,用B超声图像、组织病理学切片和血清学指标（透明质酸和羟脯氨酸）评估不同剂量的黄芪当归复方治疗血吸虫病肝纤维化的效果,发现血吸虫病大耳兔经黄芪当归复方治疗后肝纤维化程度降低,其血清透明质酸含量与羟脯氨酸含量也较治疗前明显降低。这一结果表明黄芪当归复方对血吸虫病肝纤维化有很好的治疗作用,且高剂量优于低剂量的治疗效果。建立了一种新的选择性测定尿中羟脯氨酸含量的高效液相色谱（HPLC）法。本文以9-芴基甲氧基羰酰氯为衍生试剂,以3,4-脱羟脯氨酸为内标,用HPLC-DAD联用仪器快速测定尿中羟脯氨酸含量。此方法检出限为2.0μmol/L（S/N=3）,回收率为97.45%。本方法具有样品处理步骤简单、准确度高、重现性好、分离时间短等优点,适合大批量样品测定。并用此方法测定了血吸虫病肝纤维化动物模型治疗前后的尿羟脯氨酸含量变化,对比肝纤维化病理学诊断结果,发现尿羟脯氨酸含量与肝纤维化程度呈一定的相关关系。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.1 中药药效物质基础研究现状
• 1.2 黄芪当归复方研究现状
• 1.2.1 黄芪当归复方的化学成分研究进展
• 1.2.2 黄芪当归复方的临床应用
• 1.3 肝纤维化的中医治法
• 1.4 论文研究的目的和内容
• 第二章 黄芪当归复方物质基础研究（Ⅰ）——挥发性成分的归属分析
• 2.1 引言
• 2.2 实验
• 2.2.1 样品来源
• 2.2.2 仪器试剂
• 2.2.3 供试品的制备
• 2.2.4 检测条件
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 精密度试验
• 2.3.2 重复性试验
• 2.3.3 黄芪当归复方挥发油组分的归属分析
• 2.4 小结
• 第三章 黄芪当归复方物质基础研究（Ⅱ）——非挥发性成分的归属分析
• 3.1 引言
• 3.2 实验与分析
• 3.2.1 HPLC-DAD检测黄芪当归复方及其单味药中非挥发性组分
• 3.2.2 LC-DAD-MS分析黄芪当归复方非挥发性成分归属
• 3.3 小结
• 第四章 黄芪当归复方对兔血吸虫病肝纤维化的药效研究
• 4.1 引言
• 4.2 实验
• 4.2.1 实验材料
• 4.2.2 实验方法
• 4.2.3 统计学分析
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 影像学B超检验结果
• 4.3.2 组织病理学切片实验结果
• 4.3.3 血清学诊断结果
• 4.4 小结
• 第五章 尿羟脯氨酸在黄芪当归复方对肝纤维化疗效评价中的研究
• 5.1 引言
• 5.2 实验
• 5.2.1 仪器与试剂
• 5.2.2 色谱条件
• 5.2.3 样品预处理及衍生化
• 5.3 结果与讨论
• 5.3.1 衍生试剂的选择
• 5.3.2 样品处理方法
• 5.3.3 流动相组分比例的优化
• 5.3.4 方法精密度
• 5.3.5 稳定性试验
• 5.3.6 线性范围及检出限
• 5.3.7 加标回收率分析
• 5.4 尿羟脯氨酸在评价黄芪当归复方治疗血吸虫病肝纤维化效果中的研究
• 5.4.1 材料与方法
• 5.4.2 结果与讨论
• 5.5 小结
• 第六章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间主要的研究成果