氟乐灵与秋水仙素诱导萝卜同源四倍体及小孢子培养初步研究

论文摘要

萝卜（Raphanus sativus L.）是中国一种重要蔬菜作物,种质资源丰富。多倍体育种能够提高作物产量与品质；游离小孢子培养能够在短时间内获得纯合植株,缩短育种时间。但是目前萝卜多倍体种质高效的诱导体系尚未建立,特别是采用氟乐灵诱导萝卜多倍体研究还未见报道；萝卜游离小孢子培养胚状体与再生植株频率比较低。本研究采用秋水仙素和氟乐灵两种试剂诱导同源四倍体植株,并比较不同的倍性鉴定方法；通过小孢子培养筛选出具有成胚能力的基因型,探讨影响萝卜小孢子培养中胚状体产生的因素,以期为萝卜四倍体与单倍体植株高效诱导和种质创新提供技术支撑。萝卜四倍体诱导技术体系研究中,以本实验室保存的6个萝卜基因型为材料,用秋水仙素和氟乐灵两种药剂诱导同源四倍体植株。研究结果表明,采用生长点滴定法,以0.1%的秋水仙素处理,在6个基因型中都获得了四倍体植株,Nau-xht与Nau-zhqh诱导率最高（16.67%）。采用0.2mmol/L和1mmol/L氟乐灵除草剂处理,Nau-dyl3与Nau-xbch都获得四倍体,诱变率为40%,诱导效果比秋水仙素诱导的效果明显增加。四倍体植株气孔大小、保卫细胞内叶绿体数目、花器官大小、花粉粒纵横径都与二倍体植株存在显著差异,表现出“巨大性”。研究表明将形态学鉴定、气孔鉴定和染色体计数鉴定结合起来可以准确确定变异株的倍性。在萝卜同源四倍体种质创新与鉴定方面,采用0.1%秋水仙素滴定11个萝卜基因型幼苗生长点,均得到四倍体植株,诱导率最高为33.33%,最低为16.67%,并通过植株形态鉴定、气孔特征鉴定、花粉粒鉴定和染色体计数法鉴定出了萝卜四倍体植株。在萝卜小孢子培养研究中,以本实验室96个萝卜基因型为材料,筛选具有成胚能力的基因型,并对花蕾长度与小孢子发育时期的关系、及培养基中添加不同浓度的2,4-D,6-BA等影响游离小孢子培养的因素进行研究。研究结果表明：有7个基因型形成了胚状体,基因型是决定胚状体发生的决定因素；其中材料“09-4265”形成了再生植株；花蕾长度为3-4.5mm时小孢子发育阶段处于单核靠边期；NLN-13培养基中添加0.2mg/L2,4-D和0.1mg/L的6-BA能够有效促进胚状体的形成。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 縮略词表
• 引言
• 第一章 文献综述
• 1 萝卜多倍体研究进展
• 1.1 创造萝卜多倍体的方法
• 1.1.1 浸种法
• 1.1.2 生长点滴定法
• 1.2 萝卜多倍体鉴定方法
• 1.2.1 形态学鉴定
• 1.2.2 细胞学鉴定
• 1.2.3 花粉母细胞染色体鉴定
• 1.2.4 生理生化鉴定
• 1.3 萝卜多倍体育种中的困难
• 2 萝卜游离小孢子培养
• 2.1 小孢子培养的机理
• 2.2 影响游离小孢子培养成功的因素
• 2.2.1 基因型
• 2.2.2 供体植株的小孢子的发育阶段
• 2.2.3 材料的预处理
• 2.2.4 小孢子培养密度
• 2.2.5 培养基类型及成分
• 2.2.6 热激处理
• 2.2.7 培养条件
• 2.3 本研究目的与意义
• 第二章 氟乐灵诱导萝卜同源四倍体研究
• 摘要
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 种子处理
• 1.2.2 生长点滴定处理
• 1.3 鉴定方法
• 1.3.1 苗期鉴定
• 1.3.2 气孔鉴定
• 1.3.3 花期鉴定
• 1.3.4 花粉母细胞减数分裂鉴定
• 1.4 数据分析
• 2 结果与分析
• 2.1 不同药剂诱导同源四倍体效果比较
• 2.1.1 秋水仙素诱导同源四倍体萝卜的效果
• 2.1.2 氟乐灵除草剂诱导同源四倍体萝卜的效果
• 2.2 植株倍性的鉴定
• 2.2.1 形态鉴定
• 2.2.2 二、四倍体植株花期鉴定
• 2.2.3 二、四倍体气孔与叶绿体比较
• 2.2.4 二、四倍体花粉粒大小与花粉萌发率的比较
• 2.2.5 花粉母细胞减数分裂鉴定
• 3 讨论
• 3.1 不同药剂诱导萝卜四倍体效果
• 3.2 四倍体萝卜不同鉴定方法
• 第三章 萝卜同源四倍体种质创新与鉴定研究
• 摘要
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 种子处理
• 1.2.2 生长点滴定处理
• 1.3 鉴定方法
• 1.3.1 苗期鉴定
• 1.3.2 气孔鉴定
• 1.3.3 花期形态鉴定
• 1.3.4 花粉母细胞减数分裂鉴定
• 2 结果与分析
• 2.1 秋水仙素处理后的植株形态观察
• 2.2 秋水仙素处理后变异株的气孔变化
• 2.3 秋水仙素处理后变异植株的花粉大小形状
• 2.4 秋水仙素处理诱导四倍体植株及花粉母细胞特征
• 3 讨论
• 第四章 萝卜小孢子培养的初步研究
• 摘要
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 取材
• 1.2.2 小孢子发育时期的观察
• 1.2.3 小孢子密度的调整
• 1.2.4 培养基的制备
• 1.2.5 小孢子的分离和培养
• 1.2.6 不同培养基成分处理
• 2 结果与分析
• 2.1 小孢子发育时期的观察
• 2.2 不同基因型间胚状体诱导效果比较
• 2.3 不同培养基对胚状体诱导的影响
• 3 讨论
• 3.1 小孢子发育时期对游离小孢子培养的影响
• 3.2 不同的基因型对游离小孢子影响
• 3.3 不同培养基成分对游离小孢子培养的影响
• 全文结论
• 参考文献
• 发表论文情况
• 致谢