HaSNPV在HzAm1细胞中的复制研究

论文摘要

本论文主要运用实时荧光定量PCR 技术对HaSNPV 感染对数期与平台期HzAm1细胞的复制差异进行了定量分析,并且进一步研究了造成这种差异的原因;得到了9 个病毒基因的转录谱;并且研究了HaSNPV 感染HzAm1 细胞后对宿主细胞自身的核糖体蛋白RpL13 转录水平的影响。第一章:文献综述。简要介绍了杆状病毒的分类、形态结构、复制、分子生物学研究进展及应用研究进展;对实时荧光定量PCR 技术的原理进行了详细的介绍;最后叙述了本论文的目的和意义。第二章:HaSNPV 感染对数期与平台期HzAm1 细胞的复制差异分析。在本研究中,使用实时荧光定量PCR 技术对此差异进行了定量分析。实验结果表明:HaSNPV 在感染HzAm1 细胞后7h 开始复制,并且BV 在感染18h 后开始释放。当感染对数期细胞时,吸附侵入细胞的病毒数量、BV 释放的数量、最终的病毒产量以及病毒表达的蛋白产量明显高于被病毒感染的平台期细胞。在14-20hpi,HaSNPV 在对数期细胞和平台期细胞内的倍增时间分别为1.7h 和1.9h。由此看来,在对数期细胞中病毒的合成量明显高于平台期细胞的主要原因是最初吸附侵入到细胞内的BV 粒子数量存在差异,而不是复制速度的不同。在144hpi,对数期细胞内25%病毒粒子出芽分泌到胞外,而在平台期细胞内只有13%的病毒粒子总量的出芽。总的说来,对数期细胞与平台期细胞相比,更利于病毒侵入与释放。我们推测,细胞膜的流动性决定了入侵细胞的BV 的数量。细胞膜流动性的测定实验进一步证实了这个观点。第三章:HaSNPV 的9 个基因的转录谱分析。使用反转录和实时荧光定量PCR技术,对HaSNPV 的几个预期的早期基因、早晚期基因、晚期基因、极晚期基因的转录时相进行分析,结果表明:这些基因的起始转录时间与其自身的启动子类型基本是一致的。但是预期的早期基因pkip 晚期才开始转录;预期的早晚期基因ha107 早期不转录,仅在晚期转录。这些基因的转录量一般都在病毒感染细胞72 小时后达到最大值,并且极晚期基因polyhedrin 的转录水平明显高于其它

论文目录

• 第一章 文献综述
• 第二章 HaSNPV感染对数期与平台期HzAm1细胞的复制差异分析
• 第三章 HaSNPV 的9 个基因的转录谱分析
• 第四章 HzAm1 细胞RpL13 基因的序列分析及病毒感染对其转录水平的影响
• 第五章 结论
• 参考文献
• 发表文章目录
• 致谢