GLP-1对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用机制研究 ——PI3K抑制剂对其保护作用的影响

论文摘要

目的：1.体外培养乳鼠心肌细胞。2.研究胰高血糖素样肽-1（glucagon-like peptide-1, GLP-1）对缺氧/复氧（hypoxia-reoxygenation, H/R）条件下的乳鼠心肌细胞的作用及可能的作用机制。3.为GLP-1相关药物临床应用的安全性和有效性提供理论依据。方法：1.体外培养乳鼠心肌细胞,通过倒置显微镜形态学观察以及免疫细胞化学方法鉴定心肌细胞。2.实验分两步：第一步验证GLP-1是否对缺氧/复氧损伤的心肌细胞有保护作用,将心肌细胞随机分为三组：A组：正常对照组,不加任何处理;B组：缺氧/复氧损伤模型组（H/R）；C组：GLP-1（10nmol/L）+H/R组。第二步观察PI3K阻断剂LY294002对GLP-1保护作用的影响,心肌细胞随机分为五组：A组：正常对照组,不加任何处理；B组：缺氧／复氧损伤模型组（H/R）；C组：GLP-1（10nmol/L）+H/R组;D组：GLP-1（10nmol/L）+H/R+PI3K阻断剂LY294002（5μmol/L）组;E组：H/R+LY294002（5μmol/L）组。3.试剂盒测定各组培养液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）活性。4.碘化丙锭（propidium iodide, PI）单染,以流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。5.试剂盒检测各组半胱天冬酶-3（caspase-3）活性。结果：1.经镜下形态学观察、H-E染色和a-actin鉴定培养细胞为心肌细胞,且纯度可达90%。2.GLP-1能够抑制缺氧／复氧引起的心肌细胞损伤。在缺氧16小时复氧4小时后检测LDH活性、细胞凋亡率和casepase-3活性,结果显示,在H/R组中LDH活性、细胞凋亡率和casepase-3活性均明显高于正常对照组（P<0.01）,表明缺氧／复氧模型构建成功。而GLP-1+H/R组中LDH活性、细胞凋亡率和casepase-3活性明显低于H/R组（P<0.01）,表明GLP-1能够抑制缺氧/复氧引起的心肌细胞损伤。3.PI3K阻断剂LY294002可减弱GLP-1对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。为观察PI3K阻断剂LY294002对GLP-1保护心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响,在缺氧前给予LY294002+GLP-1干预,结果显示,与GLP-1+H/R组相比,LY294002+GLP-1+H/R组的LDH活性、细胞凋亡率和casepase-3活性均有所增加（分别为P<0.05,P<0.01,P<0.01）,表明LY294002可减弱GLP-1的保护作用；另外,缺氧前单独给予LY294002干预,其上述指标的变化与H/R组相比没有统计学意义。结论：本研究通过体外试验证实了GLP-1可直接作用于心肌细胞,对缺氧／复氧诱导的心肌细胞损伤产生一定的保护作用,而这种保护作用可能是由于GLP-1启动了P13K/AKT所介导的抗细胞凋亡作用。

论文目录

• 中文摘要
• Abstracts
• 符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 对象和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 附录
• 综述
• 综述参考文献
• 致谢