陆地棉抗病品种中521植株再生的研究

论文摘要

棉花是植株再生最困难的植物之～,棉花组织培养和细胞培养落后于其它作物。虽然近些年,棉花的体细胞组织培养已经有了较大的发展,而且一些实验室已经基本上建立了陆地棉再生体系,但是大多集中在少数品种上,尤其是一些模式品种,而且仍然存在着许多尚未解决的问题,如再生品种少、胚状体萌发率偏低、畸形苗率较高、再生周期长等问题,所以,不断发展新的再生体系和拓宽棉花再生植株的品种数量是目前棉花组织培养的新趋势。 为了拓宽棉花组织培养的基因型范围,增加再生植株的数量,为以后的转基因研究提供良好的受体材料。本研究以抗枯萎病、耐黄萎病、综合性状优良、生产上大面积推广的且前人未曾研究的陆地棉（Gossypium hirsutum）抗病品种中521为试验材料,对其体细胞胚胎发生、液体悬浮培养和植株再生体系进行了研究,主要结果如下: 1 以陆地棉（Gossypium hirsutum）抗病品种中521为材料,对体细胞胚胎发生和植株再生进行了研究,并在以往建立的植株再生体系基础上进行了改进和完善,建立了一套固—液结合培养的方法,得到了该品种的再生植株,且比以往的棉花植株再生的周期缩短了2个月。 2 对多种激素及其配比对愈伤组织诱导效应进行了研究,发现IBA对愈伤组织的诱导效果比IAA好;2,4-D是愈伤组织诱导的必要激素,但胚性愈伤组织的诱导需要低浓度的2,4-D;高浓度的KT易使愈伤组织硬化。 3 对谷氨酰胺和天门冬酰胺在胚性愈伤组织的悬浮培养和固体培养中的作用进行了研究,发现1.0g/L谷氨酰胺和0.5g/L天门冬酰胺对胚性愈伤组织的增殖有促进作用;0.5g/L谷氨酰胺有利于悬浮培养形成胚状体;2g/L谷氨酰胺有利于再生植株的形成。 4 对液体悬浮培养过程中的褐化问题进行了研究,发现了前人未曾报道的解决褐化问题的方法,即可以通过减少大量元素用量的方法来防止褐化问题。 5 对不同碳源和凝固剂对植株再生的影响效果进行了研究,发现蔗糖对植株再生的诱导效果要好于葡萄糖,琼脂的效果要好于Phytagel。

论文目录

• 1 引言
• 2 材料和方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 供试植物材料
• 2.1.2 愈伤组织诱导及增殖的试剂材料
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 培养基的配制方法
• 2.2.2 无菌苗培养基
• 2.2.3 最佳外植体的确定方法
• 2.2.4 激素在诱导愈伤组织及胚性愈伤组织中效应的研究方法
• 2.2.5 胚性愈伤组织诱导程序的确立方法
• 2.2.6 促进胚性愈伤组织的增殖的方法
• 2.2.7 对愈伤组织细胞形态进行观察的方法
• 2.2.8 悬浮培养体细胞胚胎发生
• 2.2.9 培养条件
• 3 结果分析
• 3.1 影响愈伤组织诱导的主要因素
• 3.1.1 诱导愈伤组织最佳培养基筛选
• 3.1.2 不同外植体诱导愈伤组织的效果
• 3.1.3 不同激素浓度组合对愈伤组织诱导的影响
• 3.2 愈伤组织细胞形态学观察
• 3.3 胚性愈伤组织程序的建立
• 3.4 胚性愈伤组织的增殖和萌发
• 3.4.1 硝态氮和氨态氮对胚性愈伤组织增殖的影响
• 3.4.2 谷氨酰胺和天门冬酰胺对胚性愈伤组织的影响
• 3.5 悬浮细胞系的建立
• 3.5.1 悬浮培养基的筛选
• 3.5.2 悬浮细胞系的建立
• 3.6 影响悬浮细胞系的因素
• 3.6.1 大量元素的不同用量对悬浮细胞生长状况的影响
• 3.6.2 不同2，4-D浓度对悬浮细胞生长的影响
• 3.7 悬浮细胞的分化和再生植株的形成
• 3.7.1 胚状体的分化
• 3.7.2 不同的培养基对再生植株形成的影响
• 4 讨论
• 4.1 愈伤组织诱导的影响因素
• 4.2 悬浮培养再生植株的影响因子
• 4.3 悬浮细胞系的胚状体发生和再生植株的形成
• 4.4 体细胞无性系变异
• 5 结论
• 6 参考文献
• 附录
• 在读期间发表的学术论文
• 作者简历
• 致谢