脂多糖对ECV304细胞增殖、ESM-1表达和THCE细胞紧密连接表达的影响

论文摘要

目的 通过脂多糖（lipopolysaccharide, LPS, 内毒素）对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell, HUVEC, ECV304）的生长、内皮细胞特异性分子-1（endothelial cell-specific molecule-1, ESM-1）表达和猴病毒40—永生性人角膜上皮[simian virus （SV） 40-immortalized human corneal epithelial, THCE]细胞中的紧密连接（tight junction, TJ）表达的影响来探讨其在炎症反应中的作用。方法 在体外,用LPS在不同时间作用于ECV304。观察ECV304形态,用MTT法对ECV304增殖情况进行分析,用免疫细胞化学方法观察ESM-1、胞外信号调节激酶（external-signal regulated kinase, ERK）在ECV304中的表达情况,以及ERK的磷酸化情况。用免疫荧光检测LPS对occludin、ZO-1、ZO-2和claudin-1在THCE细胞中的分布影响,Western blot检测LPS对occludin、ZO-1和ZO-2在THCE细胞中表达影响,并用伏欧表测定LPS对THCE细胞的跨上皮阻抗（transepithelial electrical resistance, TER）的影响。结果 加入LPS 24h后ECV304出现形态变化,48h时改变最为明显,细胞形态梭形明显,排列紊乱。加入LPS后0.5h时,1μl/ml和5μl/ml LPS作用的ECV304增殖大于正常ECV304（P<0.05）。加入LPS后1h时,1μl/ml LPS作用的ECV304增殖大于正常ECV304（P<0.05）。而2h后,三者无明显区别。与正常ECV304相比,LPS处理的ECV304的ESM-1表达明显增高,在0.5h时表达量增高最明显,1h时加入5μl/ml LPS的作用高于1μl/ml,在2h后表达量的增高有所下降。LPS对ERK在ECV304中的表达影响不显著。加入LPS 0.5h～4h期间,均能促进ECV304 ERK磷酸化,在1h和2h时,加入5μl/ml LPS的作用高于1μl/ml,8h后LPS对ERK磷酸化无影响。3μl/ml LPS处理6h的THCE细胞中,occludin、ZO-1和claudin-1在细胞边界几乎没有改变,而ZO-2在细胞边界几乎不可见。1μl/ml的LPS处理THCE细胞6h后,ZO-1和ZO-2

论文目录

• 英文缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 脂多糖对ECV304细胞增殖、ESM-1表达的影响
• 摘要（中文）
• 摘要（英文）
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 第二部分 脂多糖对THCE细胞紧密连接表达的影响
• 摘要（中文）
• 摘要（英文）
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 本课题的进一步设想
• 简历
• 致谢
• 综述 脂多糖信号转导机制的研究进展
• 一、与LPS跨膜信号转导有关的各种受体
• 二、LPS介导的细胞内信号转导
• 参考文献