论文摘要
造血微环境（hematopoietic inductive microenvironment,HIM）是造血干/祖细胞定殖、分化、发育和成熟的场所,基质细胞作为造血微环境中的重要成分,不仅与造血细胞的自我更新、增殖分化及归巢定位密切相关,而且在血液系统疾病的发生、发展和转归过程中也具有非常重要的作用。因此深入探讨基质细胞对造血的影响,对血液学的研究和发展十分重要。目前对基质细胞的研究主要集中在骨髓基质细胞方面,有关脐血基质细胞及脐血相关造血微环境生物学特性的研究报道较少。脐血中的造血干细胞较外周血和骨髓更原始,具有来源广泛,采集方便,GVHD 轻,高增殖和长期造血重建的特点,具有广阔的临床应用前景。本科室前期工作证实,脐血中存在基质细胞的前体细胞,并能通过特定的细胞因子组合使脐血基质细胞得以有效扩增;扩增后的脐血基质细胞能够分泌表达GM-CSF、TPO、SCF 等多种细胞因子。基于以上分析,本课题拟对脐血基质细胞的生物学特性进行进一步研究;同时构建VCAM-1-pcDNA3.1（+）真核表达载体,并对VCAM-1 修饰的人脐血基质细胞调控造血的作用进行初步的探讨。一、本研究的主要内容和研究方法如下: 1.应用人脐血CD34+细胞,采用Dexter 基质细胞培养体系行脐血基质细胞培养,采用细胞化学和免疫细胞化学对脐血基质细胞的细胞组成进行进一步鉴定,初步探讨脐血基质细胞传代培养的条件和方法。2.比较脐血CD34+细胞在细胞因子存在和/或脐血基质细胞支持条件下,体外扩增能力的异同,并对不同条件下扩增的细胞进行CFU-GM、CFU-E、CFU-MG 半固体培养,探讨脐血基质细胞在造血细胞体外扩增研究中可能的应用价值。3.采用半巢式RT-PCR 从人脐静脉内皮细胞中获取VCAM-1 基因,并将其定向克隆到pcDNA3.1（+）真核表达载体中,构建VCAM-1-pcDNA3.1（+）真核表达载体。4.脂质体介导VCAM-1-pcDNA3.1（+）真核表达载体转染人脐血基质细胞,半定量RT-PCR和免疫细胞化学分别从mRNA和蛋白质水平检测转染前/后hUCBSC VCAM-1表达情况。
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