雷公藤多甙联合阿魏酸钠对大鼠胶原诱导关节炎及滑膜RANKL/OPG表达的影响

论文摘要

目的:类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis, RA）是一种慢性自身免疫性疾病,其主要病变在关节,关节内可见滑膜组织异常增生、大量炎性细胞浸润以及软骨与骨进行性破坏[1]。软骨和骨破坏是RA致残的主要原因。雷公藤多甙（Tripterygium Glycoside, TG）是传统抗风湿中药雷公藤的提取物,是其免疫抑制和抗炎作用的主要有效成分。阿魏酸钠（Sodium Ferulate, SF）是中药当归和川芎的有效成分,具有改善循环、抗氧化等作用。本课题拟在建立大鼠胶原诱导关节炎（Collagen-induced arthritis, CIA）的基础上,通过观察雷公藤多甙与阿魏酸钠配伍对大鼠CIA的抑制作用,并检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α, TNF-α）、白细胞介素-1β（Interleukin-1β, IL-1β）、一氧化氮（Nitric oxide, NO）、诱导型一氧化氮合酶（Induced nitric oxide synthases, iNOS）水平及滑膜核因子-κB受体活化因子配体（Receptor activator of NF-κB ligand, RANKL ）和骨保护素（Osteoprotegerin, OPG）的表达,探讨中药有效成分配伍对CIA的治疗作用及骨保护机制,为进一步临床应用提供实验依据。方法:选择体重130-150g的Wistar大鼠,雌雄各半,留取8只作正常组,其余大鼠用于制作CIA模型;于大鼠尾根部、右足跖及背部多处皮内注射鸡Ⅱ型胶原溶液共0.2ml,第14d加强免疫一次。在造模后第21d,将成模大鼠分成模型组、TG组、SF组、TG+SF组,每组8只,除模型组外,其余各组每天给药一次,持续28d;在造模前、用药前及停药后观察大鼠的一般情况,测量体重及大鼠后足爪厚度,评价关节炎指数（AI）。停药后,腹主动脉取血处死,留取血清待检,取大鼠踝关节进行固定。应用放射免疫法（RIA）测定血清TNF-α、IL-1β水平,硝酸还原酶法测定血清NO水平,并测血清iNOS水平。对大鼠关节进行脱钙、脱水、包埋,切片,行苏木素-伊红（HE）染色,光镜下观察关节病理变化并进行评分。对滑膜组织进行RANKL/OPG蛋白表达的免疫组织化学检测,并采用计算机图像分析系统对其表达量进行分析。所有数据均应用SPSS 13.0软件进行统计分析,所得结果均用x±s表示。组间均数比较采用单因素方差（one-way ANOVA）分析。结果:1雷公藤多甙联合阿魏酸钠对CIA大鼠一般情况的影响CIA大鼠于造模后第10d开始出现关节肿胀,第14d达到高峰,二次加强免疫后肿胀更加明显;第21d造模大鼠重明显减少,与正常组比较有显著性差异（P<0.05）;随着病程进展,AI及足爪肿胀厚度逐渐增加,在造模后第28d达到高峰,与正常组相比有显著性差异（P<0.05）;给药28d后各用药组两者均下降,与模型组相比有显著性差异（P<0.05）;配伍组又明显低于TG组和SF组（P<0.05）;模型组与正常组相比有显著性差异（P<0.01）。2雷公藤多甙联合阿魏酸钠对CIA大鼠血清TNF-α、IL-1β水平的影响模型组和各用药组血清TNF-α、IL-1β水平均明显高于正常组（P<0.05）;模型组和SF组明显高于TG组和配伍组（P<0.05）;TG组明显高于配伍组（P<0.05）;模型组和SF组无显著性差异（P>0.05）。3雷公藤多甙联合阿魏酸钠对CIA大鼠血清NO、iNOS水平的影响模型组、TG组和SF组血清NO、iNOS水平明显高于正常组和配伍组（P<0.05）;模型组明显高于TG组和SF组（P<0.05）;TG组和SF组无显著性差异（P>0.05）;配伍组和正常组无显著性差异（P>0.05）。4雷公藤多甙联合阿魏酸钠对CIA大鼠关节组织病理的影响病理结果显示,模型组大鼠关节滑膜组织有大量炎性细胞浸润,关节面不完整,有血管翳形成;用药组滑膜组织炎性细胞浸润减轻,骨破坏程度降低。模型组和各用药组病理积分均明显高于正常组（P<0.05）;模型组明显高于各用药组（P<0.05）;TG组和SF组明显高于配伍组（P<0.05）;TG组和SF组无显著性差异（P>0.05）。5雷公藤多甙联合阿魏酸钠对CIA大鼠滑膜组织RANKL和OPG表达的影响免疫组化染色显示,模型组和各用药组关节滑膜组织RANKL、OPG表达量及RANKL/OPG比值明显高于正常组（P<0.05）;模型组和SF组明显高于TG组和配伍组（P<0.05）;TG组明显高于配伍组（P<0.05）;模型组与SF组无显著性差异（P>0.05）。结论:1雷公藤多甙与阿魏酸钠联合应用对大鼠胶原诱导关节炎具有显著治疗作用,且疗效优于单用雷公藤多甙,提示阿魏酸钠对雷公藤多甙治疗CIA具有增效作用。2雷公藤多甙治疗CIA的作用机制与降低血清中前炎性细胞因子TNF-α、IL-1β及NO、iNOS水平,下调滑膜RANKL表达及RANKL/OPG比值等因素有关。3阿魏酸钠对雷公藤多甙增效作用的可能机制包括:通过降低NO、iNOS水平,减轻骨破坏;通过改善全身及关节局部微循环,提高雷公藤多甙的生物利用度。4中药有效成分配伍治疗CIA的增效作用,为临床中西医结合治疗RA提供了新思路。

论文目录

• 中文摘要
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• 研究论文 雷公藤多甙联合阿魏酸钠对大鼠胶原诱导关节炎及滑膜RANKL
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 个人简历