论文摘要
口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的一种烈性家畜传染病,为了制备安全、有效的新型基因工程疫苗,人们积极探索FMDV转基因植物的研究,研究结果表明用植物表达系统生产安全有效的口蹄疫口服疫苗是完全可行的。本实验室已构建了FMDV P1全长基因的高效植物表达载体并用于转化马铃薯。本研究在此基础上,寻找影响口蹄疫基因在马铃薯中高效表达的主要因子,对抗性筛选标记和抑制剂进行浓度筛选试验,对不同的马铃薯品种材料确定适宜的预培养时间、农杆菌载体、农杆菌菌液浓度及侵染时间,建立了比较完善的遗传转化体系。通过农杆菌介导法与基因枪法对2 个马铃薯品种和3 种马铃薯外植体进行遗传转化,对获得的抗性苗应用PCR、PCR-Southern、Southern杂交、斑点杂交等技术进行检测,得到了转目的基因马铃薯阳性植株,表明已将FMDV P1 全长基因导入马铃薯中。对阳性植株进行SDS-PAGE 实验,初步推断FMDV P1 全长基因在马铃薯中进行了表达。FMDV P1 全长基因转化马铃薯阳性苗的获得以及目的基因的有效表达,为用马铃薯作为生物反应器生产口蹄疫病毒疫苗提供了理论依据,为研制开发新型基因工程药物奠定了基础。
论文目录
第一篇 文献综述1 植物基因工程的研究进展1.1 植物基因工程转化方法1.2 植物基因工程技术的应用1.3 植物基因工程的安全性1.4 我国植物基因工程存在的问题及对策1.5 植物基因工程在农业中的发展前景2 转基因植物疫苗的研究进展2.1 转基因植物疫苗的作用机理2.2 利用转基因植物生产疫苗的原理和方法2.3 植物反应器生产疫苗的优缺点及评价2.4 转基因植物疫苗的研究重点2.5 转基因植物疫苗的应用与前景3 马铃薯基因工程的研究进展3.1 基因工程技术在马铃薯抗病育种上的应用3.2 基因工程技术在马铃薯抗虫育种上的应用3.3 基因工程技术在马铃薯品质改良上的应用3.4 基因工程技术在马铃薯生产疫苗上的应用4 口蹄疫的研究进展4.1 口蹄疫及其危害4.2 口蹄疫病原4.3 口蹄疫的主要特点4.4 口蹄疫的防治措施4.5 口蹄疫疫苗的研究和发展4.6 口蹄疫疫苗的应用5 本研究的意义第二篇 研究内容第一章 利用农杆菌介导法将FMDV P1 全长基因导入马铃薯1 材料1.1 植物材料1.2 菌株和质粒1.3 培养基1.4 酶和生化试剂1.5 主要仪器设备2 试验设计2.1 头孢霉素与卡那霉素适宜浓度的筛选2.2 影响马铃薯农杆菌遗传转化因子试验2.3 马铃薯不同品种、外植体对农杆菌转化的效果2.4 试验结果调查与数据处理3 试验方法3.1 植物材料的预培养3.2 卡那霉素适宜浓度的筛选3.3 农杆菌介导法将FMDV P1 全长基因导入马铃薯3.4 抗性植株的鉴定4 结果与分析4.1 卡那霉素浓度对马铃薯成苗率的影响4.2 头孢霉素浓度对Favorita 抗性愈伤诱导率的影响4.3 头孢霉素浓度对东农303 抗性愈伤诱导率的影响4.4 预培养时间对马铃薯抗性愈伤诱导率的影响4.5 不同的农杆菌菌液浓度及侵染时间对马铃薯抗性愈伤诱导率的影响4.6 农杆菌介导FMDV P1 全长基因转化的抗性植株检测结果5 讨论第二章 利用基因枪法将FMDV P1 全长基因导入马铃薯1 试验材料1.1 植物材料1.2 供试质粒1.3 培养基1.4 主要仪器设备2 试验设计3 实验方法3.1 质粒DNA 的大量提取与纯化3.2 植物材料的预处理3.3 基因枪轰击3.4 转基因植株的检测4 结果与分析4.1 基因枪轰击距离对马铃薯抗性芽诱导率的影响4.2 转基因植株的PCR 检测4.3 转基因植株的斑点杂交4.4 转基因植株的PCR-Southern 杂交4.5 基因枪法获得的转基因植株数及其转化率4.6 转基因植株的SDS-PAGE 分析5 讨论结论参考文献
相关论文文献
- [1].FMDV P1基因DNA疫苗构建及免疫实验(英文)[J]. Agricultural Science & Technology 2013(08)
- [2].FMDV P1基因在重组PRV的表达及实验免疫研究[J]. 中国兽医学报 2011(02)
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