论文摘要
苦瓜的药用成分皂甙具有降血糖、免疫调节、抗氧化、调节内分泌、降低胆固醇和抗肿瘤等作用。为了通过苦瓜细胞的悬浮培养生产苦瓜皂甙，本文对建立苦瓜细胞悬浮培养体系进行研究。本文是通过愈伤组织获得的细胞来进行悬浮培养，因此实验第一步是将苦瓜实生苗诱导出愈伤组织。为获得适合液体悬浮培养的疏松、易碎的愈伤组织，因此将诱导出的愈伤组织进一步继代并且优化培养。再从优化培养了的愈伤组织中分离出细胞，然后进行悬浮培养。愈伤组织的诱导与继代培养的优化：利用不同的激素配比，对苦瓜实生苗的各个器官进行愈伤组织诱导，比较其生长情况。通过实验得出，IAA与6-BA或KT搭配比2.4-D与6-BA或KT搭配对苦瓜愈伤组织的诱导及生长要好。当6-BA浓度较高（4mg／L）时，利于苦瓜愈伤组织的诱导。在优化培养条件时，采用单因素实验，确定影响苦瓜愈伤组织形态及生长的因素和水平，再根据正交实验确定使苦瓜愈伤组织快速生长的同时且疏松易碎。通过正交实验得出：在MS培养基的基础上添加103.125mg／L的硝酸铵，100mg／L的水解酪蛋白，蔗糖浓度为30g／L，激素浓度为6-BA0.5mg／L+0.2mg／L2.4-D时，可使苦瓜愈伤组织快速增殖。植物细胞悬浮培养是指细胞或细胞聚集体在液体培养基中进行悬浮培养，培养物可以在培养瓶中在摇床上培养，也可以在生物反应器中进行大规模培养。成功的悬浮培养体系应满足3个基本条件，一是悬浮培养物分散性良好；二是均一性好；三是生长迅速。一个良好的悬浮细胞系可以在短时间内大量繁殖。采用单因素实验，先确定适合细胞生长和皂甙合成的因素和水平，再采用正交实验，找出细胞生长和皂甙合成的最适水平。得出结论：影响苦瓜细胞生长的因素主次顺序为B（接种量）＞D（激素配比浓度）＞C（蔗糖浓度）＞A（硝酸铵添加量），其中B、D的影响非常显著。培养条件即在LS2.5培养基的基础上，再添加206.25mg／L的硝酸铵，30g／L的蔗糖，1.0mg／L的6-BA和0.5mg／L的IAA，接种量为4.5g／L。影响苦瓜细胞皂甙合成的因素主次顺序为C（蔗糖浓度）＞A（硝酸铵添加量）＞B（接种量）＞D（激素配比浓度），其中A、C的影响极其显著，B的影响非常显著。培养条件即在LS2.5培养基的基础上，再添加103.125mg／L的硝酸铵，50g／L的蔗糖，0.5mg／L的6-BA和0.2mg／L的IAA，接种量为4.5g／L。