论文摘要
增生性玻璃体视网膜病变（proliferative vitreoretinopathy,PVR）是孔源性视网膜脱离的并发症,也是造成视网膜脱离手术失败的常见原因。大多数学者认为PVR的发生始于细胞（主要是视网膜色素上皮细胞和神经胶质细胞）的增殖和移行,目前越来越多的研究表明,血小板源性生长因子（platelet-derived gowth factor,PDGF）对诱发视网膜色素上皮细胞（retinalpigment epithelium,RPE）的增殖、移行,并最终导致PVR起到了重要作用。本实验针对PDGF-A基因,应用RNA干涉（RNAinterference,RNAi）技术,在PDGF-A基因的信使RNA（messenger RNA,mRNA）序列上寻找三个干涉靶点,分别通过化学合成的siRNA和小发夹RNA质粒表达载体转染人视网膜色素上皮细胞及大鼠玻璃体腔,经逆转录PCR（reversetranscription polymerase chain reaction,RT-PCR）、蛋白免疫印记技术（Western-blot）等方法来检测其对PDGF-A干涉效果,筛选有效干涉靶位点,并进一步研究PDGF-AA与视网膜色素上皮细胞及PVR的关系。本研究的创新性包括:（1）成功筛选出PDGF-A基因有效干涉靶点序列;（2）构建高效转录该靶序列的pGPU6/GFP/Neo-shRNA质粒载体;（3）利用pGPU6/GFP/Neo-shRNA抑制RPE细胞的增殖和迁移,为最终预防和治疗PVR奠定实验基础。