盐胁迫下紫花苜蓿根系蛋白质组的初步分析

论文摘要

土地盐碱化是影响农业生产和生态环境的严重问题。利用生物技术提高牧草和农作物耐盐碱性，可以实现对盐碱地的有效利用和改良，而克隆耐盐碱相关基因、研究耐盐碱调控机制，是通过基因工程手段提高植物耐盐碱性的基础。本文以高耐盐苜蓿品种“中苜一号”为试验材料，应用双向凝胶电泳技术对其根系蛋白质组的表达谱进行差异分析。本试验对双向电泳的一些重要技术环节进行探讨，对其过程中蛋白质样品的制备、等电聚焦、平衡、凝胶染色等几个重要环节进行了优化。通过比较研究，得出酚抽提法适合紫花苜蓿根系总蛋白质的提取；改良的胶体考马斯亮兰方法是较灵敏且重复性高的蛋白质染色方法；建立了适合紫花苜蓿的2-DE技术平台。采用优化的双向电泳方法，对盐胁迫下苜蓿根系蛋白质组进行差异分析，共得到533个蛋白点，其中59个蛋白点表达量发生改变，改变量超过2倍，其中17个蛋白点表达量上调，42个蛋白点表达量下将，并对其分子量、pH值进行了初步理论鉴定。本试验将蛋白质组学的新方法应用于苜蓿抗逆机制的研究，也展示了可将其应用于牧草的其它研究的可能性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 蛋白质组学研究进展
• 1.1.1 蛋白质组学的概念
• 1.1.2 蛋白质组学内容
• 1.1.3 蛋白质组学的研究方法
• 1.2 植物蛋白质组学研究进展
• 1.2.1 植物器官或组织的蛋白质组学研究
• 1.2.2 植物亚细胞的蛋白质组学研究
• 1.3 蛋白质组学应用于植物逆境胁迫研究的进展
• 1.3.1 高温胁迫
• 1.3.2 低温胁迫
• 1.3.3 水分胁迫
• 1.3.4 盐胁迫
• 1.3.5 氧化胁迫
• 1.3.6 机械伤害
• 第二章 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 实验试剂
• 2.1.3 实验仪器
• 2.1.4 实验主要试剂配制
• 2.2 方法
• 2.2.1 蛋白质提取
• 2.2.2 蛋白质浓度测定
• 2.2.3 第一向固相pH梯度等电聚焦
• 2.2.4 IPG胶条的平衡
• 2.2.5 第二向SDS-PAGE电泳
• 2.2.6 凝胶染色
• 2.2.7 电泳凝胶图像分析
• 2.2.8 蛋白质凝胶斑点切取
• 2.2.9 蛋白质质谱分析
• 第三章 结果与分析
• 3.1 紫花苜蓿根系蛋白质的提取及双向电泳条件的优化
• 3.1.1 不同蛋白质提取方法的比较、选择
• 3.1.2 蛋白提取液和裂解液的选用
• 3.1.3 蛋白上样量的确定
• 3.1.4 一向等电聚焦条件的优化
• 3.1.5 平衡条件的优化
• 3.1.6 二向SDS-PAGE电泳条件的优化
• 3.1.7 染色方法的比较
• 3.1.8 凝胶图像分析
• 3.2 紫花苜蓿双向电泳图谱分析
• 3.3 盐胁迫下紫花苜蓿根系蛋白质组的差异表达分析
• 第四章 全文结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 作者简历