三氧化二砷和肼苯哒嗪体外逆转ERα表达作用效果的比较

论文摘要

背景和目的从20世纪70年代起，原为乳腺癌低发区的亚洲国家发病率逐年升高，在我国特别是在北京、上海等经济发达地区，乳腺癌已有成为威胁女性健康首要恶性肿瘤。在乳腺癌中雌激素受体（ER）常作为一个重要分子标志物用于评估激素依赖性、预测内分泌治疗的效果。根据ER表型差异，将乳腺癌分为ER阳性乳腺癌和ER阴性乳腺癌。大约2／3乳腺癌患者表达ER，肿瘤细胞生长具有雌激素依赖性。临床上对于ER阳性乳腺癌患者，常采取雌激素撤除的内分泌治疗，其疗效等同于化疗。ER失表达的机理不甚清楚，研究发现，ER阴性乳腺癌ER基因表达沉默与基因重排、突变、缺失等无关，可能与其启动子区CpG岛异常甲基化有关。目前已被证实有去甲基化作用的药物主要有5-杂氮-2-脱氧胞嘧啶，三氧化二砷，肼苯哒嗪等。我们选取了两种国产药物。三氧化二砷是一种传统的抗肿瘤中药，目前已用于临床的血液肿瘤的治疗。同时它也具有使去除ER阴性乳腺癌ER基因启动子区CpG岛异常甲基化作用。肼苯哒嗪是一种抗高血压药物，由于其产生的副反应较重，临床上应用很少，主要用于妊娠时的高血压病。本实验探讨三氧化二砷和肼苯哒嗪两种去甲基化药物在最佳有效浓度时，诱导MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞株雌激素受体重新表达作用的比较。材料与方法1、选用雌激素受体（ER）阴性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MDA-MB-435常规培养。将对数生长期的MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞调整细胞浓度为5×105／ml，分别换含As2O3的L-15培养液，至As2O3终浓度为2.0μmol／L，换含肼苯哒嗪的L-15培养液，至肼苯哒嗪终浓度为10μmol／L，连续培养72h。以不加药同期培养的MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞作为阴性对照。2、采用RT-PCR技术检测两种药物处理后的MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞ERa基因mRNA表达情况。并用imagej软件分析两种药物去甲基化作用的强弱。3、采用免疫组织化学技术检测经两种药物处理后的MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞ERa蛋白的表达情况。4、实验数据经SPSS13.0统计软件处理，采用方差分析，以a=0.05为差异显著性标准。结果1、免疫组化法检测经三氧化二砷和肼苯哒嗪处理的MDA-MB-231细胞浆上均可见ERa蛋白的表达，阳性率（％）：三氧化二砷为52.04±2.38，肼苯哒嗪为51.07±1.43。两组数据比较差别无统计意义（P＞0.05）。MDA-MB-435细胞浆上均可见ERa蛋白的表达，阳性率（％）：三氧化二砷为55.15±6.56，肼苯哒嗪为54.11±5.36。两组数据比较差别无统计意义（P＞0.05）。2、MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞株雌激素受体在三氧化二砷和肼苯哒嗪诱导作用中无明显差异（P＞0.05）。3、RT-PCR法检测经三氧化二砷和肼苯哒嗪处理的MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞均能扩增出ERa基因，结果用imagej软件进行分析显示两种药物的去甲基化作用没有明显的差异。结论1、三氧化二砷和肼苯哒嗪两种去甲基化药物在最佳有效浓度时，诱导MDA-MB-231细胞株雌激素受体重新表达作用无明显差异。2、三氧化二砷和肼苯哒嗪两种去甲基化药物在最佳有效浓度时，诱导MDA-MB-435细胞株雌激素受体重新表达作用无明显差异。3、三氧化二砷和肼苯哒嗪两种去甲基化药物作用效果无明显差异，为去甲基化药物选择提供了理论依据，丰富去甲基化药物的基础研究，为临床内分泌治疗提供了新的途径。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 论文部分 两种去甲基化药物作用效果的比较
• 引言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 附图
• 参考文献
• 综述部分 雌激素受体与乳腺癌内分泌治疗
• 综述
• 参考文献
• 缩略词表
• 在校期间发表的论文
• 致谢