论文摘要
目的：建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR法检测血清中miR-21表达，并应用该法检测不同宫颈疾病患者血清中miR-21的表达水平，考察血清miR-21能否作为宫颈癌早期诊断和预后判定的基因指标。方法：1、培养Hela细胞，Trizol法提取生长期细胞的总RNA。设计miR-21茎环逆转录引物和PCR引物，通过RT-PCR和FQ-PCR检测细胞或血清中miR-21的表达，分析熔解曲线确定miR-21表达的特异性和稳定性。2、应用此方法检测不同宫颈疾病患者血清中miR-21的表达水平：收集宫颈炎、子宫肌瘤、宫颈癌术前和术后患者的血清各15例，以U6为内参，分析不同宫颈疾病患者血清中miR-21表达是否有差异，宫颈癌手术前后血清miR-21表达水平的变化对宫颈癌预后判定作用。运用spss13.0统计软件处理，以a=0.05作为检验标准。结果：1、建立了SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR法检测不同宫颈疾病患者血清中miR-21表达水平，熔解曲线单一，产物特异。2、宫颈癌患者血清中miR-21表达水平明显高于子宫肌瘤、宫颈炎等其他良性宫颈疾病（P<0.05），宫颈癌患者手术切除后血清中miR-21水平明显下降（P<0.05），差异有统计学意义。子宫肌瘤和宫颈炎患者血清中miR-21表达差异不明显（P>0.05）。提示血清miR-21表达与宫颈癌相关，除用于早期诊断外，还可用于预后判断。结论：SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR法检测血清中miRNA，快速简便、敏感性高、特异性好。血清中miR-21的检测可能作为宫颈癌早期诊断和手术切除的预后判断的一个基因指标。