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文冠果壳苷体外抗肿瘤活性及抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖的机制研究

2020-12-06阅读(967)

文冠果壳苷体外抗肿瘤活性及抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖的机制研究

论文摘要

本论文主要研究了文冠果壳苷体外抗肿瘤活性,并初步探讨了其抑制人乳腺癌细胞系MCF-7细胞增殖的机制。通过MTT法考察了文冠果壳苷对肿瘤细胞和正常人外周血淋巴细胞的增殖抑制作用。采用吖啶橙（AO）和溴化乙啶（EB）双染法考察细胞形态学变化。通过流式细胞术分析药物对MCF-7细胞体积的影响。通过DNA琼脂糖凝胶电泳检测文冠果壳苷对MCF-7细胞的DNA损伤作用。通过流式细胞术检测了文冠果壳苷对人乳腺癌细胞MCF-7细胞周期分布的影响。通过流式细胞术检测了药物引起的MCF-7细胞线粒体膜电位的变化。通过使用抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）检测文冠果壳苷对MCF-7细胞氧化应激系统的影响。通过使用细胞坏死抑制剂necrostatin-1检测文冠果壳苷对MCF-7细胞增殖抑制作用的影响。结果表明:文冠果壳苷对多种肿瘤细胞系均有抑制细胞增殖的作用,对不同肿瘤细胞的IC50值分别为5.10μM（HepG-2）、4.07μM（SGC-7901）、3.64μM（A375-S2）、4.56μM（A431）和4.2μM（MCF-7）。文冠果壳苷在明显抑制肿瘤细胞增殖的剂量范围内,对人外周血淋巴细胞未见增殖抑制作用。9μM文冠果壳苷与MCF-7细胞培养0h、3h、6h、9h、12h后,荧光显微镜下观察AO/EB染色的MCF-7细胞,细胞质有空泡产生,但未见细胞核染色质固缩。9μM文冠果壳苷与MCF-7细胞培养6h、9h、12h后,细胞体积变大。9μM文冠果壳苷与MCF-7细胞培养0h、3h、6h、9h、12h后,琼脂糖凝胶电泳后DNA电泳呈明显的弥散性条带。此外,文冠果壳苷9μM作用MCF-7细胞24小时使细胞周期停滞在G1期。提示9μM文冠果壳苷处理MCF-7细胞后可能引起MCF-7细胞坏死。9μM文冠果壳苷与MCF-7细胞培养6h、9h、12h后,引起MCF-7细胞线粒体膜电位下降。NAC可减弱9μM文冠果壳苷的细胞增殖抑制作用。不同浓度的细胞坏死抑制剂necrostatin-1（2.5、5、10、20和40μM）对文冠果壳苷诱导的MCF-7细胞增殖抑制作用无影响。推测文冠果壳苷引起MCF-7细胞死亡可能是通过线粒体途径,并且氧化应激系统参与了这一进程,但这种细胞坏死很有可能不是经由Fas/TNFR引起并通过RIP1激酶途径的细胞坏死。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 前言
  • 一 抗肿瘤药物概述
  • 二 细胞死亡
  • 1 细胞凋亡
  • 1.1 细胞凋亡的形态学特征
  • 1.2 细胞凋亡的生化特征
  • 1.3 细胞凋亡的分子机制
  • 2 细胞坏死
  • 3 细胞凋亡和细胞坏死的区别
  • 4 细胞自噬
  • 5 其他死亡方式
  • 三 细胞坏死的分子机制
  • 1 线粒体
  • 2 氧化还原信号通路
  • 3 细胞因子
  • 4 离子通道
  • 5 其他
  • 四 立题依据
  • 实验材料
  • 一、细胞
  • 二、药品及配制方法
  • 三、试剂
  • 四、仪器
  • 实验方法
  • 一 肿瘤细胞培养
  • 二 MTT法测定文冠果壳苷对不同肿瘤细胞的增殖抑制作用
  • 三 MTT法测定文冠果壳苷对人外周血淋巴细胞的作用
  • 四 AO-EB荧光双染法观察细胞形态学变化
  • 五 流式细胞仪检测细胞周期分布
  • 六 流式细胞仪检测线粒体膜电位、检测文冠果壳苷对细胞体积的影响
  • 七 流式细胞仪检测细胞自噬
  • 八 DNA提取及电泳
  • 九 预孵育NAC及necrostatin-1对MCF-7细胞生长抑制的影响
  • 十 数据处理
  • 实验结果
  • 1.文冠果壳苷对肿瘤细胞的增殖抑制作用
  • 1.1 文冠果壳苷对HepG-2、SGC-7901、A375-S2、A431细胞的增殖抑制作用
  • 1.2 文冠果壳苷抑制人乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖作用
  • 2.文冠果壳苷对文冠果壳苷对人外周血淋巴细胞的作用
  • 3.MCF-7细胞的形态学变化
  • 4.文冠果壳苷对MCF-7细胞体积的影响
  • 5.琼脂糖凝胶电泳
  • 6.流式细胞仪检测细胞自噬
  • 7.流式细胞仪检测细胞周期分布
  • 8.文冠果壳苷对MCF-7细胞线粒体膜电位的影响
  • 9.抗氧化剂NAC对文冠果壳苷引起的MCF-7细胞增殖抑制的影响
  • 10.细胞坏死抑制剂necrostatin-1对文冠果壳苷引起的MCF-7细胞增殖抑制的影响
  • 讨论
  • 1.文冠果壳苷对肿瘤细胞的增殖抑制作用
  • 2.文冠果壳苷对正常人外周血淋巴细胞的增殖抑制作用
  • 3.文冠果壳苷诱导MCF-7细胞死亡形式
  • 4.细胞坏死的调节机制
  • 4.1 线粒体
  • 4.2 氧化应激
  • 4.3 经由Fas/TNFR诱导的细胞坏死途径
  • 结论
  • 参考文献
  • 致谢
  • 缩略词表

    • 相关论文文献

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