聚维酮碘对体外培养血管内皮细胞增殖的影响

论文摘要

目的:聚维酮碘（PVP-Ⅰ）是临床常用消毒剂,在使用过程中,是否对机体的细胞生长产生影响尚不很清楚。本实验采用体外培养血管内皮细胞,研究不同浓度PVP-Ⅰ对细胞增殖及SOD活性的作用,以确定PVP-Ⅰ在应用过程中是否对血管内皮细胞产生影响。方法:1细胞培养及形态学观察:以含有10%胎牛血清的RPMI 1640培养基常规培养ECV-304内皮细胞株,传代待细胞生长状态稳定后进行各项实验。制备单细胞悬液密度为0.8～1.0×105/ml,种24孔板,待细胞贴壁后加入不同浓度的PVP-Ⅰ,每板均设对照组,于4、8、12和24h时观察细胞生长状况。2 MTT实验,检测细胞增殖情况:在PVP-Ⅰ处理后的96孔细胞培养板中每孔添加MTT试剂20μl（5mg/ml）,37℃孵育4、8、12和24h后终止培养,小心弃去培养液,用胰酶消化细胞,每孔加入150μl二甲基亚砜（DMSO）溶解,振荡10min。用酶标分析仪在490nm波长下测其光吸收值（OD）。3流式细胞术:待测细胞经离心—PBS冲洗—吹匀—固定—再离心—冲洗—吹打—染色（4℃,20～30 min）后,400目尼龙网过滤后上机检测。ModFit分析软件分析,用细胞S期比率（SPR）表示相对增殖力。SPR=S/（G0/G1+S+G2/M）。4免疫细胞化学:利用PV法检测PVP-Ⅰ处理后ECV-304细胞中PCNA、Ki-67的表达。5细胞SOD活性检测:利用试剂盒对培养细胞的上清液中SOD活性进行检测。结果:1 PVP-Ⅰ培养4h时除3000μg/L～4000μg/L实验组细胞计数及细胞活性明显高于对照组外,其它各组间差别无统计学意义;8h时900～3000μg/L实验组细胞计数及细胞活性明显高于对照组;12h时700～2500μg/L实验组细胞计数及细胞活性明显高于对照组,3000μg/L实验组与对照组无差别,4000μg/L实验组的细胞计数及细胞活性明显低于对照组且可见明显的形态学改变;24h时100～1800μg/L实验组细胞计数及细胞活性明显高于对照组,2500～4000μg/L实验组的细胞计数及细胞活性明显低于对照组且可见明显的形态学改变。2流式细胞术:在含不同有效碘浓度的培养液中培养细胞24h后,对照组的细胞S期比率（SPR）低于1000μg/L实验组而高于4000μg/L实验组。3免疫细胞化学:不同有效碘浓度处理ECV-304细胞24h,当有效碘浓度较低时（＜500μg/L）随有效碘浓度的升高PCNA及Ki-67的表达增加,然而当有效碘浓度较高时（＞1000μg/L）随有效碘浓度的增高PCNA及Ki-67的表达呈现降低的趋势。4细胞SOD活性:经PVP-Ⅰ作用后的内皮细胞SOD活性受到影响,PVP-Ⅰ培养24h后,SOD活性发生变化,PVP-Ⅰ浓度低于1000μg/L时,SOD含量增加;PVP-Ⅰ浓度高于1000μg/L时,SOD含量迅速减少。结论:1.PVP-Ⅰ对于体外培养的内皮细胞有刺激增殖和引起损伤的双重作用。在较低浓度PVP-Ⅰ或者刺激时间较短时,体外培养的内皮细胞增殖活性明显增高,随着PVP-Ⅰ剂量的增加以及作用时间的延长,该促增殖作用消失,细胞增殖被抑制,细胞活性降低并可见明显的形态学改变。促增殖和抑制作用与PVP-Ⅰ存在时间剂量效应关系。2.PVP-Ⅰ是通过对内皮细胞自由基含量、细胞周期和细胞凋亡的调控来影响其增殖活性。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 符号说明
• 论文正文
• 前言
• 材料
• 实验方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 附图
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的论文
• 附件
• 学位论文评阅及答辩情况表