Gab2基因在人肺癌中表达的初步研究

论文摘要

研究目的：作为一类支架蛋白,生长因子受体结合蛋白2 （Growth factor receptor-bound protein 2, Grb2）的相关结合蛋白家族（Grb2-associated binder protein, Gab）参与了细胞内多种信号转导通路,是酪氨酸激酶（protein tyrosine kinases, PTKs）激活的下游信号转导通路的关键分子。Gab2是这个家族的重要成员,可被PTKs磷酸化激活,进而招募多种信号分子（如p85、SHP2和Crk）,在细胞增殖、存活、分化和凋亡等过程中发挥重要作用。最近研究表明,Gab2在卵巢癌、胃癌、急性髓细胞性白血病、乳腺癌和转移性黑素瘤中是过表达的,揭示了它为一个癌蛋白,在肿瘤发生中起重要作用。但是,Gab2在肺癌中的研究还未见报道。本实验研究的目的是观察Gab2在人肺癌组织和肺癌A549细胞中的表达情况,探讨Gab2表达与肺癌临床病理参数的关系,为肺癌的治疗和预后判断提供参考依据。研究方法：为了研究Gab2在肺癌中的表达情况,收集了天津医科大学肿瘤医院2010年3月～2010年5月间,经手术切除并经病理证实的97例肺癌组织标本。鳞癌40例,腺癌37例,其它类型的肺癌20例（包括4例大细胞癌,5例腺鳞癌,4例肺肉瘤样癌,3例复合性小细胞癌,2例恶性肿瘤,1例淋巴上皮瘤样癌,1例基底细胞样鳞状细胞癌）。选取对照组25例,以距离肿瘤边缘大于5cm的肺癌癌旁正常肺组织作为对照。所有标本均经10%的福尔马林溶液固定、石蜡包埋、4μm厚连续切片处理,同时收集手术切除的88例新鲜肺癌组织标本。采用实时定量PCR、免疫组织化学和western blot技术,观察其在肺癌组织中的表达情况。常规培养A549肺癌细胞,采用RNAi和western blot技术,观察其在RNAi之后Gab2蛋白的表达情况。结果：1.应用免疫组织化学方法检测了Gab2蛋白在肺癌组织与肺正常组织中的表达情况,结果表明,Gab2蛋白在肺鳞癌、腺癌和其他类型的癌中的高表达率分别为62.50%,51.35%和75.00%,均高于其相应对照组（远端正常肺组织）中的高表达率12.00%,Gab2蛋白表达在肺癌组织与肺正常组织之间的差异具有统计学意义（P<0.001）。但是,Gab2蛋白表达在鳞癌、腺癌和其它类型的癌之间比较无统计学意义（P>0.05）。2.进一步评估Gab2表达水平同临床各病理学参数之间关系,由于只有17例其它类型的癌（除去3例小细胞癌）,所以我们主要讨论Gab2表达同鳞癌和肺癌之间临床各病理学参数之间的关系。结果发现,Gab2表达同腺癌的肿瘤大小（P=0.0170）和鳞癌的UICC分级（P=0.0079）之间有统计学意义（P<0.05）,但是同年龄、性别、组织学分级、淋巴结转移和侵袭程度之间没有统计学意义（P>0.05）。3.实时荧光定量PCR检测Gab2 mRNA在15例肺癌组织和相对应的15例肺正常组织中表达水平,结果发现,Gab2 mRNA在10例肺癌组织的基因表达水平要高于其在肺正常组织中的表达,二者之间的差异具有统计学意义（t=2.632,P=0.020<0.05）。4.采用western blot技术检测Gab2蛋白在38例新鲜肺癌组织标本（16例鳞癌,16例腺癌和6例其它类型的癌）和20例肺正常组织标本的表达情况,结果发现,Gab2蛋白在肺癌组织的表达水平比在正常肺组织表达水平高,二者之间的差异具有统计学意义（P=0.0023<0.05）,但是Gab2蛋白表达在鳞癌、腺癌和其它类型的癌之间比较,差异无统计学意义（P>0.05）,与免疫组织化学方法获得的结果相一致。5.采用western blot技术观察肺癌A549细胞转染Gab2 RNAi质粒表达载体前后的Gab2蛋白表达情况。转染后Gab2蛋白表达水平明显降低,为后续实验做好了准备。结论：Gab2蛋白和mRNA在肺癌组织中的表达水平比癌旁正常组织明显升高,而且,Gab2表达同腺癌的肿瘤大小和鳞癌的UICC分级之间有显著的相关性。因此,Gab2基因在肺癌的发生发展中可能起重要作用,其表达增强可能诱导了肺癌的发生。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 对象和方法
• 1.1 临床资料及实验材料
• 1.2 免疫组织化学
• 1.3 Real Time PCR
• 1.4 Western Blot
• 1.5 Gab2在肺癌细胞A549中的表达
• 结果
• 2.1 免疫组织化学检测Gab2蛋白的表达情况
• 2.2 Gab2在肺鳞癌和腺癌组中的表达与临床病理参数的关系
• 2.3 实时荧光定量检测Gab2基因表达
• 2.4 western blot中Gab2蛋白的表达情况
• 2.5 转染A549肺癌细胞后Gab2蛋白表达的结果
• 2.5.1 RNAi质粒表达载体对A549肺癌细胞Gab2蛋白表达的结果
• 2.5.2 转染后western blot结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述 Gab2蛋白的研究进展
• 综述参考文献
• 致谢