白僵菌的形态与分子鉴定及对东亚飞蝗的致病作用

论文摘要

白僵菌是白僵菌属（Beauveria）真菌的统称，其中大多数是对昆虫具有寄生作用的虫生真菌，在害虫生物防治上具有重要的作用。本研究从野外采集的感染白僵菌的虫体上分离了多个白僵菌菌株，通过形态学和分子生物学的方法进行鉴定，并研究了白僵菌对东亚飞蝗的致病性。1.为避免分离过程中的细菌污染，本研究首先筛选出了抗细菌污染的分离培养基（PDA+青霉素+链霉素），获得适合的PDA培养基添加抗生素浓度为100IU/mL。从野外采集的15个僵虫经过分离，获得了8个白僵菌菌株，通过形态学鉴定和ITS序列分析鉴定，确认为球孢白僵菌；对供试的球孢白僵菌B.bassiana、布氏白僵菌B.brongniartii、多形白僵菌B.amorpha、苏格兰白僵菌B.caledonica、粘孢白僵菌B.velata、蜘蛛白僵菌B.aranearum菌株进行形态观察和对菌丝、分生孢子的测量，发现布氏白僵菌、多形白僵菌、苏格兰白僵菌形态相近，不易区分；粘孢白僵菌和蜘蛛白僵菌不易区分。2.应用ITS序列和β-Tubulin的部分基因序列对供试菌株进行比对，不能够完全区分各个菌株。分别以ITS序列和β-tubulin基因序列使用三种软件构建系统发育树，结果树的结构大体相似，球孢白僵菌的不同菌株分散在不同的分支中，而其他种的菌株分散在球孢白僵菌的不同分支中；在不同的树中，分支部位始终一致。3.选用15个球孢白僵菌菌株，使用三角瓶菌落饲喂法、浸虫法和浸叶法三种方法侵染东亚飞蝗3龄蝗蝻，结果使用菌落饲喂法试虫的致死速度最快，同时获得致死速度最快的菌株为Bb03。使用不同浓度的Bb03菌株孢子悬浮液侵染东亚飞蝗3龄蝗蝻，结果最适的孢子浓度为1.54×107孢子/mL。本试验从形态学和分子学水平上对白僵菌的种进行了分类鉴定，为白僵菌种的鉴定提供了理论依据，并筛选出Bb03菌株为对东亚飞蝗的强致病菌株，可为生产中东亚飞蝗的生物防治研究提供参考。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 文献综述
• 1.1 白僵菌的系统分类
• 1.1.1 白僵菌的分类地位
• 1.1.2 白僵菌的分类简史
• 1.1.3 白僵菌的分类方法
• 1.1.4 分子生物学在分类上的应用
• 1.2 白僵菌的应用
• 1.2.1 白僵菌的侵染途径
• 1.2.2 白僵菌在生防上的应用
• 1.3 影响白僵菌毒力因素
• 1.3.1 白僵菌的寄主专化性
• 1.3.2 产酶水平
• 1.3.3 营养条件
• 1.3.4 环境条件
• 1.4 东亚飞蝗的生物防治
• 1.5 本研究的目的
• 第2章 白僵菌的分离与形态观察
• 2.1 抗生素 PD A 培养基筛选试验
• 2.1.1 材料与方法
• 2.1.2 结果与分析
• 2.2 白僵菌的分离
• 2.2.1 材料与方法
• 2.2.2 结果与分析
• 2.3 不同种的白僵菌的形态
• 2.3.1 材料与方法
• 2.3.2 各菌株的菌落形态
• 2.3.3 白僵菌各个种的形态
• 2.4 小结
• 第3章 白僵菌对东亚飞蝗的致病作用
• 3.1 材料和方法
• 3.1.1 供试菌株
• 3.1.2 供试虫源
• 3.1.3 试验方法
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 不同处理方法对东亚飞蝗的致死作用
• 3.2.2 生物测定
• 3.3 小结
• 第4章 白僵菌的分子鉴定及系统发育分析
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 供试菌株
• 4.1.2 试验试剂
• 4.1.3 试验方法
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 基于 IT S 序列的分子鉴定
• 4.2.2 β -t ub u li n 引物设计及验证
• 4.2.3 基于β -t u bu li n 基因序列分析
• 4.3 结论与讨论
• 第5章 结论
• 参考文献
• 缩略语词汇表
• 附录 图版
• 致谢
• 攻读硕士学位期间的研究成果