濒危植物内蒙野丁香（Leptodermis ordosica H.C.Fu et E.W.Ma）组织培养的研究

论文摘要

内蒙野丁香（Leptodermis ordosica H.C.Fu et E.W.Ma）隶属于茜草科（Rubiaceae）野丁香属（Leptodermis Wall）,旱生矮小灌木,为内蒙古二级保护植物。其植株具有较高的观赏价值,并且具有药用价值。本文对内蒙野丁香离体系统做了初步研究,了解不同外植体、培养基等条件对内蒙野丁香组织培养的影响,筛选出了进行组织培养的最适外植体和最适培养基配方,基本弄清了其体细胞胚发生的途径,为进一步的基因工程改良、人工种子的开发利用等研究提供了基础资料。同时建立了内蒙野丁香的细胞悬浮培养体系,为扩大和保护珍稀濒危植物资源,生产次生代谢产物提供理论基础。主要研究结果有四点:1.筛选出内蒙野丁香诱导愈伤组织的最适外植体是叶片,对叶片进行消毒的最适方案是用70%酒精15s+0.1%HgCl2消毒2min,有效材料获得率可达到90%以上。2.筛选出诱导愈伤组织最适培养基组合为:MS+2mg/L 6-BA+10mg/L IAA;最适继代培养基为:MS+2.0mg/L 6-BA+5.0mg/L IAA;最适分化培养基为:MS+4.0mg/L 6-BA+2.0mg/L IAA;最适生根培养基为:MS+0.01mg/L NAA。3.通过组织细胞学方法研究内蒙野丁香体细胞胚的起源与发生部位,发现内蒙野丁香体细胞胚多为单细胞起源,愈伤组织表面发生,体细胞胚经过球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚而发育成再生植株。4.以选择黄绿色颗粒状的愈伤组织进行细胞悬浮培养为最佳,培养基选择MS+IAA 5.0mg/L+6-BA 2.0mg/L。在细胞悬浮培养过程中,细胞生长曲线呈近“S”型,对数生长期在接种后的915天。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 组织培养的产生与发展
• 1.2 植物组织培养的理论基础及其研究进展
• 1.2.1 愈伤组织的获得
• 1.2.2 再生植株的获得
• 1.2.3 植物细胞悬浮培养
• 1.3 植物组织培养的应用
• 1.3.1 苗木快速繁殖
• 1.3.2 脱毒苗培育
• 1.3.3 新品种培育
• 1.3.4 种质资源保存
• 1.3.5 次生代谢物的生产
• 1.4 内蒙野丁香基本概况及其研究目的和意义
• 2 试验材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 材料的消毒
• 2.2.2 外植体的筛选及初代培养
• 2.2.3 继代增殖培养
• 2.2.4 细胞悬浮培养
• 2.2.5 悬浮培养系生长特性的测定
• 2.2.6 分化培养
• 2.2.7 体细胞胚的发生观察
• 2.2.8 生根培养
• 2.2.9 炼苗和移栽
• 2.3 数据处理
• 2.3.1 定性指标
• 2.3.2 定量指标
• 3 试验结果与分析
• 3.1 内蒙野丁香外植体无菌体系的建立
• 3.2 诱导愈伤组织最佳外植体与培养基的筛选
• 3.3 愈伤组织的继代培养
• 3.4 愈伤组织分化的最佳培养基筛选
• 3.4.1 愈伤组织的分化
• 3.4.2 愈伤组织分化的形态发生
• 3.4.3 愈伤组织分化过程中体细胞胚的发生
• 3.5 根的形成
• 3.6 室外移栽
• 3.7 悬浮培养下细胞的结构和体细胞胚胎发生
• 3.7.1 悬浮培养单细胞的形成
• 3.7.2 悬浮培养单细胞的结构特点
• 3.7.3 悬浮培养下体细胞胚胎发生及胚状体形成
• 3.7.4 内蒙野丁香愈伤组织悬浮培养的生长曲线
• 3.7.5 内蒙野丁香愈伤组织悬浮培养细胞数量的变化
• 4 讨论与小结
• 4.1 内蒙野丁香外植体的消毒与处理
• 4.2 内蒙野丁香不同外植体愈伤组织的诱导及继代生长
• 4.3 愈伤组织的分化
• 4.4 体细胞胚的发育
• 4.4.1 体细胞胚的发生方式
• 4.4.2 特殊的生理隔离现象
• 4.4.3 体细胞胚胎发育与淀粉粒的变化关系
• 4.4.4 体细胞胚发生相对于器官发生的显著特点
• 4.5 关键影响因素
• 4.6 生根培养
• 4.7 移栽成败之关键原因
• 4.8 内蒙野丁香的细胞悬浮培养
• 5 主要结论
• 5.1 内蒙野丁香组织培养再生体系的建立
• 5.2 体细胞胚胎发生体系的建立及细胞学研究
• 5.3 建立了内蒙野丁香的细胞悬浮系
• 致谢
• 参考文献
• 图版
• 作者简介