论文摘要
本研究选取中国荷斯坦奶牛群体共计250头个体为研究对象,采用PCR-RFLP技术对试验牛群中存在的乳铁蛋白基因的四个多态位点进行了PCR扩增、酶切检测和测序分析,发现该牛群的乳铁蛋白基因四个多态位点均存在三种基因型;结合试验牛群的DHI测定所得到的育种资料记录和生产性能指标（主要选择体细胞评分、产奶量、乳脂率和乳蛋白率）,运用最小二乘线性模型,对这几个位点的多态性与奶牛乳腺炎之间的相关性进行了分析,发现乳铁蛋白基因-916位点的T/G突变和-927位点的G/A突变所产生的不同基因型与生产性状之间的效应检验不显著,而+72位点的T/C突变和-478位点的G的插入所产生的不同基因型之间的生产性能指标出现差异,并找到了具有乳腺炎抗性的基因型和优良的等位基因,为进一步的标记辅助选择提供了有力的依据,并为奶牛乳腺炎的抗病育种工作提供了理论依据。研究结果如下:根据NCBI上已登录的乳铁蛋白基因序列并参考Seyfert所报道的多态位点,确定所研究的四个突变位点并对乳铁蛋白基因进行了PCR扩增和测序分析。研究发现:本试验奶牛群体在这四个位点上均存在突变,分别是-927位点的G到A的突变,-916位点的T到G的突变,-478位点的G的插入和+72位点的T到C的突变,预期结果与报道的一致。利用改造的酶切位点对-927位点、-916位点和+72位点的PCR扩增产物分别进行TaqⅠ、HaeⅢ和EcoT14Ⅰ酶切,利用已存在的酶切位点对-478位点进行HpyF10VⅠ酶切,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳对酶切产物检测分析,发现在这四个突变位点上均存在有三种基因型:AA基因型、AB基因型和BB基因型。结合DHI测定所记录的该试验奶牛群的生产性能数据,利用统计分析软件SAS将乳铁蛋白基因四个位点上的突变所产生不同基因型对体细胞评分、产奶量、乳脂率和乳蛋白率的效应进行最小二乘均值显著性检验。结果发现:+72位点（T/C）的AB基因型个体的SCS值极显著低于BB基因型个体（P＜0.01）,显著低于AA基因型个体（P＜0.05）,BB基因型个体与AA基因型个体差异不显著（P＞0.05）;同时,AB基因型个体的产奶量值显著高于AA基因型、BB基因型个体（P＜0.05）,表明本试验奶牛群中AB基因型个体表现出乳腺炎抗性;-478位点（/G）AA基因型个体的SCS值极显著低于AB基因型、BB基因型个体（P＜0.01）,同时AA基因型个体的产奶量值显著高于AB基因型、BB基因型个体,表明本试验奶牛群中AA基因型个体表现出了乳腺炎抗性;另外,-478位点（/G）AB基因型个体的乳蛋白率、乳脂率显著高于AA基因型、BB基因型个体。因此,A等位基因是优良的等位基因。-916位点（T/G）和-927位点（G/A）的基因型对体细胞评分、产奶量、乳脂率、乳蛋白率的效应检验不显著。